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申请/专利权人：广州金域医学检验中心有限公司
摘要：本发明公开了一种游离睾酮的检测方法，在包括底板和平衡透析膜的平衡透析系统中，加入待测血清样品、生理盐水和透析缓冲液，封膜后进行透析；透析结束后，在透析液中加入内标工作液，加入甲基叔丁基醚，振荡后离心；冷冻后取上清，氮气吹干，复溶，进行液相色谱‑质谱检测。本发明的检测游离睾酮的方法不仅可以减少取样量，减少透析平衡时间，提高样本处理通量，无需衍生化即具有高灵敏度，可检测低至＜1pmolL的浓度水平，且可以有效分离多种内源与外源干扰物，确保方法定量的精准性。
主权项：1.一种游离睾酮的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1、在包括底板和平衡透析膜的平衡透析系统中，加入待测血清样品、生理盐水和透析缓冲液，封膜后进行透析；所述待测血清样品占待测血清样品与生理盐水体积和的50％～90％；所述血清样品和生理盐水的体积和，与所述透析缓冲液的体积比为1：0.9～1.1；所述透析包括：35℃～38℃，200rpm～300rpm条件下，恒温孵育3h～5h；2、透析结束后，在透析液中加入内标工作液，加入甲基叔丁基醚，振荡后离心；冷冻后取上清，氮气吹干，复溶，进行液相色谱-质谱检测；所述液相色谱的条件包括：色谱柱：C18柱；流动相A为甲醇，流动相B为质谱级水；所述液相色谱的洗脱程序为：0～4.5min，流动相A48-65％，流动相B52-35％；4.5～5.8min，流动相A65％，流动相B35％；5.8～5.81min，流动相A65％→100％，流动相B35％→0％；5.81～6.50min，流动相A100％，流动相B0％；6.50～6.51min，流动相A100％→58％，流动相B0％→42％；6.51～8.00min，流动相A58％，流动相B42％；所述质谱检测的离子源为电喷雾离子源，在正离子模式下，采用多反应监测模式；游离睾酮定量离子对的质荷比为：母离子289.2，子离子97.0；游离睾酮定性离子对的质荷比为：母离子289.2，子离子109.0；内标离子对1的质荷比为：母离子292.2，子离子100.042；内标离子对2的质荷比为：母离子292.2，子离子112.047。
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