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申请/专利权人：南京鼓楼医院
摘要：本发明公开了一种基于滚环扩增与分子信标的tsRNA检测方法，包括如下步骤：1）针对目标tsRNA设计哑铃状DNA模板，使用T4连接酶将哑铃状模板缺口连接；2）目标tsRNA竞争结合DNA模板互补区，破坏DNA模板哑铃状结构，使其呈环状；DNA模板成环后作为模板，目标tsRNA作为引物，在phi29DNA聚合酶的作用下，发生滚环扩增；3）在扩增产物中加入分子信标并进行信号检测。本发明无需对目标tsRNA进行预处理、逆转录等步骤，大大节约了时间；恒温即可扩增，对精密仪器的依赖性降低；序列相近的干扰RNA序列不完全互补，无法破坏哑铃结构，就无法开启扩增，特异性强。
主权项：1.一种基于滚环扩增与分子信标的tsRNA检测方法，所述方法不用于疾病的诊断与治疗，其特征在于，包括如下步骤：1）针对目标tsRNA设计哑铃状DNA模板，tsRNA序列为5'AUCCCACUCCUGACACCA3’，使用T4连接酶将哑铃状模板缺口连接，形成闭合哑铃状结构；2）目标tsRNA竞争结合DNA模板互补区，破坏DNA模板哑铃状结构，使其呈环状，哑铃状DNA模板序列为：5'P-TGGGATTCTAAATCACTATGGTCGCGCTAGGTATATATCCCACTCCTCCCtggtgtcAGGAG3'；DNA模板成环后作为模板，目标tsRNA作为引物，在phi29DNA聚合酶的作用下，发生滚环扩增；3）在扩增产物中加入分子信标并进行信号检测；所述分子信标序列为：5'CY5-ccgcgtCGCTAGGTATATATCCCacgcgg-BHQ23’；所述DNA模板包括支点，支点与哑铃状DNA模板互补区相连；所述支点、哑铃状DNA模板互补区，与目标tsRNA序列互补配对；所述检测方法还包括超分支滚环扩增，按所述步骤2）滚环扩增后，引入支链引物，进行超分支滚环扩增；所述支链引物与滚环扩增产物互补配对，不与目标tsRNA完全互补配对。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京鼓楼医院 一种基于滚环扩增与分子信标的tsRNA检测方法
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