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一种鞘磷脂转运的新检测方法 

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申请/专利权人:杭州师范大学

摘要:本发明公开一种鞘磷脂转运的新检测方法。该发明包括检测不同反应条件对鞘磷脂翻转效率的影响,鞘磷脂翻转酶ATP13A2特定氨基酸位点突变对鞘磷脂翻转效率的影响。本发明从不同角度试验验证了此检测方法的可靠性,为今后的鞘磷脂的翻转检测及神经退行性疾病研究提供技术参考。

主权项:1.一种人工脂质膜,其特征在于,以野生型鞘磷脂翻转酶ATP13A2、鞘磷脂翻转酶ATP13A2突变体、NBD荧光标记的鞘磷脂、二油酰磷脂酰胆碱DOPC为原料,体外制备人工脂质膜,所述人工脂质膜的具体制备如下:S1:将4μmol二油酰磷脂酰胆碱DOPC和40nmolNBD标记的鞘磷脂溶解于1ml氯仿中并旋转蒸发干燥制备成多泡脂质体,经200nm聚碳酸酯过滤器处理形成大的单层囊泡,然后利用3mM正十二烷基β-麦芽糖苷DDM对单层囊泡去稳定,得到去稳定后的单层脂质体;S2:将纯化的野生型鞘磷脂翻转酶ATP13A2或鞘磷脂翻转酶ATP13A2突变体加入去稳定后的单层脂质体中得到重组混合物,常温混合15min,搅拌,每1ml重组混合物中加入0.3g湿洗过的生物珠,4℃旋转孵育16h,静置2min,移液收集蛋白脂质体溶液。

全文数据:

权利要求:

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