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申请/专利权人：金宇保灵生物药品有限公司
摘要：本发明公开一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗及其生产方法，属于疫苗生产技术领域。本发明提供的生产方法包括猪伪狂犬gE基因缺失病毒悬浮培养、病毒抗原液澄清、灭活后浓缩纯化和乳化配苗步骤，该方法能够实现猪伪狂犬gE基因缺失病毒大量增殖，提高病毒抗原含量和产量，且有效对病毒液进行灭活处理并降低配苗用抗原液中的杂蛋白含量，各步骤协作可以共同提高疫苗的稳定性、安全性和免疫效力，可以为猪伪狂犬病疫情的防控提供一种安全且免疫效力更强的疫苗产品。
主权项：1.一种猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗的生产方法，其包括向悬浮培养的BHK-21细胞中接种猪伪狂犬毒株JS-2012株的gE基因缺失毒株JS-2012ΔgE种毒获得病毒液，和对获得的病毒液进行澄清、先灭活后浓缩纯化以及乳化配苗处理生产获得猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗；其中所述灭活处理中采用BEI作为灭活剂；其中所述灭活处理的操作为：向经澄清的病毒液中加入BEI，使BEI的终浓度为0.002～0.004molL，待温度升至30～35℃时开始计时，灭活24～35小时，期间每隔60～120分钟搅拌一次，计时结束后，使用终浓度为2%～4%的硫代硫酸钠阻断灭活；其中所述浓缩纯化的操作为：用450KD～550KD的中空纤维柱或膜包系统将灭活病毒液进行5～10倍浓缩，再用等体积PBS进行洗滤，取浓缩并洗滤后的病毒液，加入体积浓度为9%～13%的PEG6000后于3～5℃振荡2～6h后静置过夜，经高速冷冻离心后，弃掉离心上清，将沉淀用PBS按浓缩后体积重悬，获得配苗用病毒抗原液；所述猪伪狂犬gE基因缺失灭活疫苗在2~8℃条件下的保存期为18个月以上；其中所述JS-2012ΔgE种毒的获得方式为：在BHK-21悬浮细胞中连续悬浮培养毒株JS-2012ΔgE至传代12代次以上获得；其中所述培养的条件为：在36.5℃±0.5℃，pH值6.5～7.5，搅拌转速80rpm～150rpm，溶解氧浓度30%～60%下培养至细胞活率小于50%或培养48～60小时。
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