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申请/专利权人：南开大学
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种大片段DNA组装方法及其应用。本发明将大片段DNA通过PCR方式转变为小片段DNA，然后将小片段DNA交替整合到含有两种不同抗性基因氯霉素抗性基因、四环素抗性基因的pBR322质粒上，接着再将这些新构建的质粒依次转化到底盘细胞中，实现大片段DNA的组装。本发明大片段DNA组装方法可方便、高效地对酿酒酵母染色体进行组装，为人工设计合成酿酒酵母长染色体提供了基础。同时，采用本发明组装方法能够在枯草芽孢杆菌体内组装一条完整的PNP降解途径，并成功构建了高效PNP矿化工程菌，该方法构建的工程菌具有与野生菌株相似的生长趋势，外源基因能够稳定表达，实现PNP矿化功效，为农业环境的修复提供一种可行方案。
主权项：1.一种大片段DNA组装方法，其特征在于，包括将线性化pBR322序列和抗性基因序列整合到枯草芽孢杆菌菌株的metI基因位点上，得到底盘细胞；分别将四环素抗性基因或氯霉素抗性基因插入到pBR322质粒上，得到两种分别含有不同抗性基因的质粒载体；将需要组装的大片段DNA拆分成两端含有同源序列的小片段DNA，将小片段DNA交替插入到两种含有不同抗性基因的质粒上；将携带这些小片段DNA的两种质粒依次转化到底盘细胞中，实现大片段DNA的组装。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南开大学 一种大片段DNA组装方法及其应用
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