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申请/专利权人：莆田学院

摘要：本申请涉及一种固定化酶酶解制备杉叶蕨藻中β‑1,3‑木寡糖的方法，涉及木寡糖提取的技术领域，其包括以下步骤：将杉叶蕨藻置于粉碎机中粉碎，加入NaOH，加热，过滤取滤渣；将滤渣进行浸提，得上层浸提液；往上述步骤2的浸提液中加无水乙醇，收集沉淀；乙酸中和沉淀，再去除沉淀表面残留的乙酸；得到杉叶蕨藻多糖粉末；Na2HPO4‑柠檬酸缓冲液溶解杉叶蕨藻多糖粉末；纯化获得连接类弹性蛋白多肽的重组β‑1,3‑木聚糖酶（FE）酶液；离心收集沉淀，所得硅沉淀即为固定化后的β‑1,3‑木聚糖酶；将杉叶蕨藻多糖溶液与适量固定化后的β‑1,3‑木聚糖酶混合后，所得上清液即为所述活性β‑1,3‑木寡糖；此酶解发具有性能稳定，固定化后的β‑1,3‑木聚糖酶可多次重复利用的效果。

主权项：1.一种固定化酶酶解制备杉叶蕨藻中β-1,3-木寡糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤（1），将杉叶蕨藻置于超微粉碎机中粉碎，获得海藻超微粉；向超微粉中加入0.1-0.2%的NaOH，90-95℃中加热30-40min，过滤取滤渣；步骤（2），向滤渣中加入1-2%的NaOH-H2O2溶液进行浸提（固液比：1:10~1:40），室温搅拌4-6小时，离心得上层浸提液；步骤（3），往上述步骤（2）的浸提液中加入3-4倍体积无水乙醇，并在4-10℃下静置沉淀过夜，离心收集沉淀；步骤（4），采用无水乙酸中和步骤（3）的沉淀，再用去离子水冲洗沉淀3-4次，去除沉淀表面残留的乙酸；步骤（5），真空冷冻干燥步骤（4）获得的沉淀，得到杉叶蕨藻多糖粉末；步骤（6），配置pH6.5-7.5的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液溶解杉叶蕨藻多糖粉末，溶解杉叶蕨藻多糖质量浓度为1-2%，通过液相检测溶解液中的β-1,3-木聚糖成分；步骤（7），纯化获得连接类弹性蛋白多肽的重组β-1,3-木聚糖酶（FE）酶液；向重组β-1,3-木聚糖酶（FE）酶液中添加四甲氧基硅烷，3-5min后离心收集沉淀，所得硅沉淀即为固定化后的β-1,3-木聚糖酶；步骤（8）将上述步骤（6）中所得的杉叶蕨藻多糖溶液与适量固定化后的β-1,3-木聚糖酶混合后，辅助超声酶解12-15min，超声波功率为40-75KHZ，速度为50-80rmin水浴摇床中酶解20-24h后取出，离心取上清液备用;所得上清液即为所述活性β-1,3-木寡糖；所述步骤（7），所得沉淀为固定化后的β-1,3-木聚糖酶。

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