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申请/专利权人：南通大学

摘要：本发明提供了一种基于电泳技术的单细胞蛋白质定量分析方法，包括以下步骤：1通过单细胞分离芯片组成的微孔阵列芯片，物理分离得到单细胞，并原位裂解单细胞进行蛋白质的电泳分离；2将经过电泳分离得到的蛋白质条带转印到反蛋白石结构光子晶体膜上；3SERS纳米标签显影剂与反蛋白石结构光子晶体转印膜孵育，通过SERS成像技术将蛋白质显影在条带上；4采用拉曼光谱分析，根据纳米标签的拉曼特征峰强度计算出每一种蛋白质的浓度。本发明的有益效果为：本发明的蛋白质电泳技术、SERS和有序结构光子晶体膜相结合，构建一种新的单细胞蛋白质定量分析方法，能够同时满足高灵敏和宽线性定量检测要求。

主权项：1.一种基于电泳技术的单细胞蛋白质定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：1通过单细胞分离芯片组成的微孔阵列芯片，物理分离得到单细胞，并原位裂解单细胞进行蛋白质的电泳分离；所述步骤1中的微孔阵列芯片的制备步骤如下：1.1光刻胶均匀地旋涂于硅片或铜片或钢片上，并采用紫外光照射固化光刻胶；1.2通过光刻刻蚀的方式形成光刻胶微柱阵列，并作为单细胞分离芯片的制备模板；所述步骤1.2中所使用的光刻是紫外光刻、电子束光刻、离子束光刻、X射线光刻、纳米压印光刻或激光刻蚀的一种；所述步骤1.2中的微柱阵列的圆柱的高度为1μm～120μm，直径为1μm～100μm；模板的长度为1mm～5cm，宽度为500μm～4.5cm；1.3在模板上覆盖玻璃片或塑料片，使用注射器或滴管或移液器导入丙烯酰胺水凝胶的前聚体溶液；所述步骤1.3中所使用的玻璃片是石英玻璃片、钢化玻璃片或硼酸盐玻璃片的一种,塑料片是聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或丙烯腈-丁二烯-苯乙烯塑料的一种；1.4固化后，将丙烯酰胺水凝胶胶块从模板上剥离下来，得到单细胞分离芯片；1.5把单细胞分离芯片组装到聚丙烯酰胺配置胶块上，形成微孔阵列芯片；2将经过电泳分离得到的蛋白质条带转印到反蛋白石结构光子晶体膜上；所述步骤2中的反蛋白石结构光子晶体膜的制备步骤如下：①将单分散胶体粒子通过垂直沉积或静电自组装的方式在硅片或玻璃片上形成光子晶体薄膜，并将此薄膜作为反蛋白石结构光子晶体膜的制作模板；所述步骤①中的单分散胶体粒子为聚苯乙烯、多孔硅、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸乙酯、聚乙烯、二氧化硅或二氧化钛的一种；所述步骤①中的单分散胶体粒子直径为50nm～10μm，所述的单分散胶体纳米粒子溶液中胶体纳米粒子的浓度为10wt％～90wt％；②将硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯溶液灌注到模板中，并加热固化；所述步骤②中的硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯溶液的浓度为3％～50％；固化的温度范围在40℃～80℃；③通过氢氟酸、二甲基甲酰胺或四氢呋喃的浸泡，或加热的方式，将模板粒子去除，得到反蛋白石结构光子晶体膜；所述步骤③中的反蛋白石结构光子晶体膜的长度为1mm～5cm，宽度为500μm～4.5cm；3SERS纳米标签显影剂与反蛋白石结构光子晶体转印膜孵育，通过SERS成像技术将蛋白质显影在条带上；所述步骤3中的SERS纳米标签显影剂有三部分组成；第一部分是信号标签；第二部分是增强信号标签的纳米材料；第三部分是检测抗体；所述信号标签为具有拉曼活性的分子；所述增强信号标签的纳米材料包括两类：第一类是单金属纳米粒子，其粒径分布范围为1～300nm；第二类是核壳纳米粒子，其核的尺寸范围为1～200nm；壳的厚度范围为1～100nm；所述信号标签修饰到纳米材料是通过静电吸附或共价连接的方式将标签固定在纳米粒子的表面或核壳结构纳米粒子的核壳间隙处；检测抗体修饰到纳米材料表面是通过静电吸附或共价连接的方式固定；4采用拉曼光谱分析，根据纳米标签的拉曼特征峰强度计算出每一种蛋白质的浓度。

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