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摘要：本发明公开了一种基于MIRA‑CRISPRCas12a系统的丙二酸盐克罗诺杆菌检测方法，采用高温水煮法进行克罗诺杆菌DNA快速提取，筛选出丙二酸盐克罗诺杆菌特异性序列Genbank：NZ_CP013940.12727946...2728626为检测靶标，利用MIRA等温扩增技术实现现场目的基因快速扩增，设计针对特异性序列的CrRNA，以激活Cas12a酶非特异性地切割功能，从而通过ssDNA报告探针实现对检测结果的判读。本发明构建的检测体系具有优异的灵敏度，极高的特异性，且检测时间短的优势，检测方法通用于丙二酸盐克罗诺杆菌的检测。
主权项：1.一种基于MIRA-CRISPRCas12a系统的丙二酸盐克罗诺杆菌检测方法，其特征在于：包括，采用高温水煮法对克罗诺杆菌DNA快速提取；MIRA特异性引物扩增丙二酸盐克罗诺杆菌特异性基因，得到可用于MIRA-CRISPRCas12a系统的丙二酸盐克罗诺特异性产物；设计针对丙二酸盐克罗诺杆菌特异性序列的CrRNA；通过CRISPRCas12a检测系统，特异性CrRNA靶向识别丙二酸盐克罗诺特异性产物，激活CrRNA-Cas12a非特异性切割活性，通过报告探针对检测结果判读，实现对丙二酸盐克罗诺杆菌检测；其中，所述MIRA特异性引物序列分别为SEQNO.1和SEQNO.2，CrRNA的核苷酸序列为SEQNO.9。
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百度查询： 天津科技大学 中国检验检疫科学研究院 一种基于MIRA-CRISPR Cas12a系统的丙二酸盐克罗诺杆菌检测方法
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