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一种用于揭示青光眼发生发展的细胞分子机制的方法 

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申请/专利权人:深圳市眼科医院(深圳市眼病防治研究所)

摘要:本发明涉及用于揭示青光眼发生发展的细胞分子机制的方法,包括以下步骤:构建空间转录组图谱;构建单细胞图谱;将空间转录组图谱和单细胞图谱联合分析;筛选靶标分子和细胞,体外验证靶标分子和细胞在组织中的表达特点;在特定细胞中敲除靶标分子、检测细胞表型;构建基因敲除大鼠,证实靶基因对青光眼发展的影响;在基因敲除大鼠中,靶向注射靶标细胞,验证靶标细胞对青光眼发展的影响;本项目揭示了青光眼发展过程中视网膜组织中细胞组织成及基因表达的时空动态变化,定出视网膜组织中调控青光眼发生发展相关的异常神经细胞亚群、微环境细胞亚群及关键特征表达基因。

主权项:1.一种用于揭示青光眼发生发展的细胞分子机制的方法,其特征在于,方法包括以下步骤:将SD大鼠分为正常组和检测组,分别获取不同时刻的大鼠视网膜组织作为样本;将样本分为三份并分别执行下列操作:1采用HE染色法观察视网膜形态学变化,采用免疫组织化学法检测视网膜细胞Bcl-2蛋白和Bax蛋白的变化,得到第一特征集合;2构建空间转录组图谱;3构建单细胞图谱;4将空间转录组图谱和单细胞图谱联合分析,得到第二特征集合;基于第一特征集合和第二特征集合,进行如下四项操作:1筛选靶标分子和细胞,体外验证靶标分子和细胞在组织中的表达特点;2在特定细胞中敲除靶标分子、检测细胞表型;3构建基因敲除大鼠,证实靶基因对青光眼发展的影响;4在基因敲除大鼠中,靶向注射靶标细胞,验证靶标细胞对青光眼发展的影响;综合上述四项操作结果分析,揭示RIRI导致急性闭角型青光眼细胞分子细胞机制及潜在的早期诊断和治疗的潜在靶点。

全文数据:

权利要求:

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