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申请/专利权人：无锡市江原实业技贸有限公司;江苏省原子医学研究所
摘要：本发明涉及一种基于RAA‑CRISPR‑TRFRET的鲍曼不动杆菌快速鉴别方法，属于分子诊断技术领域。具体地，本发明为解决目前菌种鉴别的不足之处，改进了现有的PCR检测手段，构建了基于RAA‑CRISPRCas12a‑TRFRET侧向流动技术的PCR检测平台。本发明通过巧妙的设计结合了重组酶介导下恒温扩增技术、CRISPRCas12与时间分辨荧光共振能量转移技术，采用侧向流动技术，实现分子级别的检测技术，尤其通过时间分辨的合理引入以及步骤的优化将检测灵敏度从5×10‑8nM至少提高到1×10‑9nM，同时还减少了反应步骤，以及由于反应步骤的设计大大降低了对设备和操作环境的要求，从而使得检测更为快速、准确。
主权项：1.一种基于RAA-CRISPR-TRFRET的鲍曼不动杆菌鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取鲍曼不动杆菌基因组作为待测样本，采用SEQIDNO.1-2所示的引物待测样本进行重组酶介导等温扩增；S2、向S1得到的扩增产物中加入CRISPR体系进行反应，所述CRISPR体系中含有SEQIDNO.3所示的crRNA以及Cas12a核酸酶；S3、将S2的产物和标记探针溶液分别加入时间分辨荧光免疫层析试剂盒中使其接触反应，以反应后的反应液为流动相进行侧向流层析，根据检测结果进行鲍曼不动杆菌的鉴别；其中，所述标记探针溶液中含有时间分辨荧光微球标记的核酸单链探针和过量的修饰有亲和素的时间分辨荧光微球，所述时间分辨荧光免疫层析试剂盒包括：加样孔，所述S2的产物和标记探针溶液通过加样孔加入时间分辨荧光免疫层析试剂盒中，反应池，所述S2的产物和标记探针溶液反应池中进行反应，包被膜，所述包被膜上设置有检测线和质控线，且检测线靠近反应池一端；所述检测线上设有捕获探针，质控线上固定有生物素，所述捕获探针与核酸单链探针互补。
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