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一种猕猴桃愈伤原生质体高效分离的方法及其在亚细胞定位中的应用 

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申请/专利权人:四川农业大学

摘要:本发明提供了一种猕猴桃愈伤原生质体高效分离的方法及其在亚细胞定位中的应用,属于植物细胞学领域。在本发明中,猕猴桃原生质体分离的方法为:愈伤组织和酶解液按照1.5~2g:10ml的比例混合进行酶解;所述酶解液中甘露醇的浓度为0.6~0.8M、纤维素酶浓度为1.8~2.5wt%、离析酶浓度为0.4~0.6wt%时,分离得到的原生质体产量最大,活力最高,收获的原生质体产量达到2.8×106个·g‑1FW,原生质体活力高达87%。本发明中猕猴桃原生质体的制备方法为猕猴桃属植物开展基因功能和分子育种研究奠定了基础。

主权项:1.一种猕猴桃愈伤组织原生质体的制备方法,其特征在于,步骤如下:1愈伤组织和酶解液按照1.5~2g:10ml的比例混合进行酶解;所述酶解液包括15~25mM4-吗啉乙磺酸、15~25mMKCL、8~15mMCaCL2、0.6~0.8M甘露醇、1.8~2.5wt%纤维素酶和0.4~0.6wt%离析酶、0.8~1.2vt%BSA、0.03~0.08vt%氨苄、0.03~0.04vt%β-巯基乙醇;2过滤酶解后的液体,收集滤液并离心,收集沉淀得原生质体;所述愈伤组织由猕猴桃组培苗外植体诱导获得,所述外植体为美味无菌猕猴桃组培苗叶片;所述酶解的条件为:23~28℃,50~70rpm;酶解时间为6.5~7.5h。

全文数据:

权利要求:

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