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申请/专利权人：中国医科大学附属第四医院

摘要：本发明公开了一种高效稳定的结直肠癌类器官培养方法，包括以下步骤：取新鲜的结直肠癌组织，清洗后切碎；向组织碎片中加入组织消化液消化，收集上悬液，为保证消化效果可短时多次消化；将上悬液离心后收集细胞沉淀并将细胞包埋至基质胶中，使用对应的类器官培养基进行培养。本发明属于类器官培养技术领域，其改良了提取原代细胞的组织消化液和结直肠癌类器官培养基，改良的组织消化液可以在提取结直肠癌原代细胞时稳定消化体系的pH，提高消化过程中细胞对污染的抗性并降低消化液对细胞活性的影响；改良的结直肠癌类器官培养基具有稳定培养体系，支持结直肠癌类器官的快速形成。

主权项：1.一种高效稳定的结直肠癌类器官培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、取新鲜的结直肠癌组织，清洗后切碎；步骤二、向组织碎片中加入组织消化液消化，可多次消化，收集上悬液，消化结果以消化成隐窝团为宜；步骤三、离心收集消化后的细胞沉淀；步骤四、将结直肠癌组织细胞包埋至基质胶中；步骤五、一段时间后使用对应的类器官培养基进行培养；步骤一所述清洗是将获取的肿瘤组织放入6cm培养皿中，加入10倍体积的酒精浸泡10s，随后弃去上清，再用含1‰primocin、1％penicillin-streptomycin的PBS缓冲液进行清洗，每次30s，清洗3次，清洗的过程中刮去脂肪层等杂质细胞；步骤二所述组织消化液包括以下组分：以advanceDMEMF12培养基为基础成分，添加如下终浓度的成分：1mgmLCollagenaseI、20μgmLDNAseⅠ、10uMY-27632、1×HEPEs、1‰primocin、1×GlutaMAX和1％penicillin-streptomycin；步骤二所述多次消化是指每次将消化时间控制在30min，通过使用100μm的细胞滤网收集上悬液并加入消化液10倍体积的advanceDMEMF12终止，将上述过滤后剩余的组织碎块重复上述步骤，直至组织大部分消化，仅剩少量的组织碎片，多次消化的目的：避免消化过度；步骤五所述类器官培养基包括以下组分：以advanceDMEMF12培养基为基础成分，添加如下终浓度的成分：30％VVL-RWN条件培养基、100ngmLR-spondin1、1％VVHEPES、1％VVGlutaMax、1％VVpenicillin-streptomycin、1‰VVprimocin、2％VVB27supplement50X、1％VVN2supplement100X、1MNicotinamide、500ugmlN-acetylcystein、500nMA83-01、1uMSB202190、1uMPGE2、50ngmLhumanEGF、10nMGastrinI、10uMY27632。

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百度查询： 中国医科大学附属第四医院 一种高效稳定的结直肠癌类器官培养方法