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申请/专利权人：大连理工大学
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种具有临近捕获功能分子及其快速制备方法，步骤如下：大肠杆菌原核表达体系表达CD38纳米抗体和磷脂酶A2受体重要结构域CTLD1、CTLD4，通过镍离子金属螯合层析和Superdex75凝胶筛分纯化得到高纯度的蛋白，表征蛋白的结构与功能；通过胺基活化和应变促进的叠氮化‑炔烃环加成反应合成捕获分子；通过生物膜层干涉技术、酶联免疫吸附实验、免疫荧光染色和流式细胞技术表征临近捕获功能分子功能；利用细胞流式分选流式细胞术分选分泌抗CTLD1抗体和抗CTLD4抗体浆细胞浆细胞并表征效率，本发明的临近捕获功能分子特异性高、合成便捷高效。
主权项：1.一种具有临近捕获功能分子的快速制备方法，其特征在于，步骤如下：1蛋白表达与纯化：大肠杆菌原核表达体系表达CD38纳米抗体、CTLD1、CTLD4的蛋白表达与纯化方式如下：依次进行细菌培养、诱导蛋白表达、收获细菌、破碎菌体获取破碎液上清，再利用镍离子金属螯合层析对相应蛋白进行粗纯，最后利用凝胶过滤层析精纯相应蛋白；2胺基活化：在温度为25℃条件下，将CTLD1与7.5倍摩尔比的DBCO-PEG5-NHSester反应；CTLD4与2.5倍摩尔比的DBCO-PEG5-NHSester反应；大肠杆菌原核表达体系表达纯化的CD38纳米抗体与5倍摩尔比的N3-PEG4-C2-NHSester反应；上述反应时间均为45min，得到产物叠氮修饰的CD38-Nb、二苯并环辛炔环修饰的CTLD1、二苯并环辛炔环修饰的CTLD4；反应后的将产物超滤换液三次，去除未反应的DBCO-PEG5-NHSester和N3-PEG4-C2-NHSester；3点击化学：在温度为4℃条件下，将叠氮修饰的CD38-Nb分别与二苯并环辛炔环修饰的CTLD1、二苯并环辛炔环修饰的CTLD4按摩尔比1：1混合，反应10-16h，得到产物CD38-Nb-CTLD1和CD38-Nb-CTLD4，产物选用凝胶过滤层析纯化。
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百度查询： 大连理工大学 一种具有临近捕获功能分子及其快速制备方法
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