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申请/专利权人：陕西岳达德馨生物制药有限公司

摘要：本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种提高酶催化生产熊去氧胆酸效率的方法。本发明将一种非离子型表面活性剂TritonX‑100添加到反应体系中，极大提高了7β‑羟基类固醇脱氢酶的催化效率，极大延长7β‑羟基类固醇脱氢酶的稳定期，增大底物承载量，且在一定浓度范围内与TritonX‑100用量正相关。加入TritonX‑100后酶催化效率极大提高，熊去氧胆酸生成率从30％提高到了96％，且底物浓度从5％提高到了7％，可应用于大规模的工业化生产。本发明提高了酶催化生产熊去氧胆酸的效率，具有重要的工业应用价值。

主权项：1.一种提高酶催化生产熊去氧胆酸效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：1培养7β-羟基类固醇脱氢酶工程菌；所述培养7β-羟基类固醇脱氢酶工程菌的具体方法包括以下步骤：1将工程菌接种到LB固体平板培养基中，进行活化培养；2从LB固体平板培养基上挑取单菌落，接种于含有50mgL卡那霉素LB液体培养基中，进行培养；3将上一步所得培养物转接到含有50mgL卡那霉素的TB液体培养基，进行培养；所述TB液体培养基包括以下组分：胰蛋白胨10～15gL、酵母提取物20～30gL、甘油3～8gL、磷酸氢二钾6～10gL、磷酸二氢钾1～3gL；在200rpmmin、37℃下震荡培养4～6h；4在上一步所得培养物中加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，继续培养；2将培养好的7β-羟基类固醇脱氢酶工程菌离心收集菌体，得到7β-羟基类固醇脱氢酶，备用；3在反应体系中加入7-酮石胆酸，用NaOH化清；4在反应体系中加入葡萄糖，搅拌溶解；5在反应体系中加入步骤2所得的7β-羟基类固醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶，搅拌均匀；6在反应体系中加入TritonX-100，搅拌均匀后用纯水补足反应体系；7加入NADP，开始反应；所述7β-羟基类固醇脱氢酶工程菌保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M20211645；所述各组分的用量为：7-酮石胆酸10gL～100gL、葡萄糖5gL～60gL、7β-羟基类固醇脱氢酶10gL～50gL、葡萄糖脱氢酶2gL～100gL、TritonX-1005gL～70gL、NADP0.01gL～0.1gL。

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