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申请/专利权人：中国农业大学

摘要：本发明公开了一种作物根际功能微生物菌群简化的方法及其应用，包括以下步骤：采用抖根法收集玉米和大豆根际土壤，将根际土壤加入氨氧化培养基、硝化培养基、无氮培养基和反硝化培养基四种不同类型的培养基进行富集培养，共进行7代传代培养获得第7代富集培养物，利用16srRNA基因高通量测序技术分析第7代富集培养物菌群组成，砂培法和土培法回接玉米和大豆验证其促生效果，构建简化的玉米和大豆根际不同功能的细菌群落。本发明基于氮循环的固氮、氨氧化、硝化和反硝化作用通过富集传代培养的方法富集玉米和大豆根际土壤，富集了玉米和大豆根际不同功能的复合微生物菌群，并测定出不同功能菌群对玉米和大豆幼苗生长的促进作用。

主权项：1.一种作物根际功能微生物菌群简化的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：S1：在玉米和大豆拔节期，按“Z”字形五点取样法采集玉米和大豆根际土壤，每点选取生长健壮的5个玉米和大豆根系；S2：采用抖根法收集得到玉米和大豆根际土壤，即将玉米和大豆根系于50mL离心管加入PBS缓冲液震荡，在转速为180rpm条件下震荡30min，在4000rpm条件下离心5min，去上清液，得到玉米和大豆根际土壤；S3：称取1g根际土壤加入1mL的无菌水制得土壤悬浮液，再分别取土壤悬浮液1mL分别加入到装有100mL的四种不同类型传代培养基中；S4：在28℃，180rpm条件下培养7d，7d后得到的富集混悬液为第一代培养物，吸取1mL第一代培养物于新的传代培养基在28℃，180rpm条件下培养7d，7d后得到的富集混悬液为第二代培养物，以此条件富集培养得到具有氨氧化、硝化、固氮和反硝化功能的第7代富集培养物；S5：利用16srRNA基因高通量测序技术对4种复合菌群第7代富集培养物进行测序，并与80％的甘油1：1在甘油管中-80℃条件下保存；S6：吸取4种复合菌群第7代富集培养物200μL均匀涂布在相对应的四种类型的传代培养基平板上于28℃培养箱中培养7d获得复合菌落；S7：挑取4种复合菌落分别接种到含有100mL的四种不同类型传代培养基的250mL玻璃三角瓶中，置于摇床上在28℃，180rpm的培养条件下培养24h，于50mL离心管中4℃，5000rpm条件下离心，去上清，无菌水重悬菌体分别得到四种不同的复合菌群菌悬液。

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权利要求：

百度查询： 中国农业大学 一种作物根际功能微生物菌群简化的方法与应用