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NGS文库浓度的标准化 

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申请/专利权人:合成DNA技术公司

摘要:下一代测序NGS工作流程中的瓶颈是文库的定量,用于准确汇集和装载测序仪器流动池或芯片。本文公开了相较于现有方法改善性能并减少时间的方法。

主权项:1.一种获得目标量的具有5'-突出端的经加工核酸分子的试剂盒,其包括:第一引物,所述第一引物包含第一部分、第二部分和第三部分,其中所述第一部分位于所述第一引物的3'端,其中所述第二部分包含3个或更多个连续的核糖核苷酸碱基并且位于所述第一部分5'侧,和其中所述第三部分位于所述第二部分5'侧并且包含两个或更多个脱氧核苷酸;第二引物,所述第二引物包含第二引物第一部分,第二引物第二部分,所述第二引物第二部分包含3个或更多个连续的核糖核苷酸碱基并且位于所述第二部分第一部分5'侧,以及第二引物第三部分,所述第二引物第三部分位于所述第二引物第二部分5'侧并且包含两个或更多个脱氧核苷酸;连接酶;具有3’外切核酸酶活性的酶;和探针,其中所述探针的至少部分与所述经加工核酸分子中的5'突出端的至少部分互补,其中所述探针包含修饰,所述修饰赋予抵抗被具有3’外切核酸酶活性的酶消化的抗性,其中所述连接酶足以连接探针和经加工核酸分子,和其中具有3’外切核酸酶活性的酶能消化未连接到所述探针的经加工核酸分子。

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