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申请/专利权人：中国林业科学研究院林业研究所

摘要：本发明涉及组织培养及基因编辑技术领域，特别是涉及一种渤丰3号杨经愈伤法高效遗传转化体系的建立方法。包括：将渤丰3号杨的半木质化茎段进行消毒处理，处理成1.5～2cm的单腋芽段后进行启动培养，得到1～2cm的腋芽；将腋芽进行生根培养，得到组培苗；取组培苗顶端2～3片嫩叶、去除边缘，处理成0.5×1cm的块后进行预培养，得到预培养叶片；将预培养叶片进行农杆菌侵染、共培养后进行愈伤组织诱导，得到抗性愈伤组织；将抗性愈伤组织进行分化筛选培养，得到抗性芽；将抗性芽进行抗性生根培养，实现渤丰3号杨遗传转化。采用本发明提供的方法提高了渤丰3号杨愈伤组织遗传转化效率，达到11.48％。

主权项：1.一种渤丰3号杨经愈伤法高效遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1将渤丰3号杨的半木质化茎段进行消毒处理，处理成1.5～2cm的单腋芽段后进行启动培养，得到1～2cm的腋芽；2将所述步骤1得到的腋芽进行生根培养，得到组培苗；所述生根培养使用的生根培养基为：WPM+0.02mgLIBA+0.02mgLNAA+30gL蔗糖+6.5gL琼脂粉，pH5.8～6.0；3取所述步骤2得到的组培苗顶端2～3片嫩叶、去除边缘，处理成0.5×1cm的块后进行预培养，得到预培养叶片；所述预培养使用的预培养基为：WPM+0.5gLMES+1mgL2,4-D+0.1mgLKT+20gL蔗糖+5gL凝胶，pH5.8～6.0；4将所述步骤3得到的预培养叶片进行农杆菌侵染、共培养后进行抗性愈伤组织诱导，得到抗性愈伤组织；所述共培养使用的培养基为：WPM+0.5gLMES+1mgL2,4-D+0.1mgLKT+100μmolLAS+20gL蔗糖+5gL凝胶，pH5.8～6.0；所述抗性愈伤组织诱导使用的培养基为：WPM+0.5gLMES+1mgL2,4-D+0.1mgLKT+3mgLHyg+200mgLTim+20gL蔗糖+5gL凝胶，pH5.8～6.0；5将所述步骤4得到的抗性愈伤组织进行分化筛选培养，得到抗性芽；所述分化筛选培养使用的培养基为：WPM+0.5gLMES+0.5mgL6-BA+0.05mgLNAA+3mgLHyg+200mgLTim+20gL蔗糖+5gL凝胶，pH5.8～6.0；6将所述步骤5得到的抗性芽进行抗性生根培养，实现渤丰3号杨遗传转化；所述抗性生根培养使用的培养基为WPM+0.01mgLIBA+3mgLHyg+200mgLTim+20gL蔗糖+5gL凝胶，pH5.8～6.0。

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