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申请/专利权人：泰澧生物技术(苏州)有限公司
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种增强CHO‑K1细胞瞬转产生抗体表达量的方法。其包括以下步骤：细胞提取以及转移，用液氮将CHO‑K1Q细胞株冻存管转移至水浴锅旁，将冻存管置于37.0℃±0.5℃水浴锅中静置解冻；对细胞进行细胞复苏以及种子扩增，将解冻后的细胞转移至已预热的培养基中进行传代扩增；瞬转，将以及复苏以及扩增的细胞内导入特定的质粒；分批补料培养，根据不同培养的情况进行灵活调整；通过生物分子分析仪进行分析，得到数据内容。本发明的有益之处：本技术方案通过PEI试剂进行瞬转及特定的细胞转染后培养方式，以有效解决CHO‑K1细胞瞬转产生抗体表达量低的问题，同时相对于传统的转染方法，通过采用本发明的方法可以提高抗体表达量47.8％。
主权项：1.一种增强CHO-K1细胞瞬转产生抗体表达量的方法，其特征在于：其包括以下步骤：细胞提取以及转移，用液氮将CHO-K1Q细胞株冻存管转移至水浴锅旁，将冻存管置于37.0℃±0.5℃水浴锅中静置解冻，解冻时间为120-150秒，过程中注意保持冻存管口始终高于水浴锅液面，解冻后立即将种子液转入装有39.0±1.0ml预热的BalanCD培养基的250ml摇瓶中，细胞密度在0.30-0.60×106cellsml，且细胞活率≥85％；对细胞进行细胞复苏以及种子扩增，将解冻后的细胞转移至已预热的BalanCDTransfectoryCHO培养基中进行传代扩增；瞬转，将以及复苏以及扩增的细胞内导入特定的质粒；分批补料培养，根据不同培养的情况进行灵活调整；通过生物分子分析仪进行分析，得到数据内容；具体瞬转包括以下步骤：配制质粒溶液，将含抗体的轻链质粒的溶液、含抗体重链质粒的溶液以及瞬转培养基进行混合，并轻柔混匀制成；配制转染复合物，将配制好的质粒溶液重加入PEI试剂，并轻柔混匀，并静置得到转染复合物；转染，将转染复合物放入待转染的CHO-K1的细胞液中，同时加入细胞转染增强液，轻柔混匀，再进行分批补料培养。
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权利要求：
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