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一种胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化工艺及其应用 

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申请/专利权人:温州医科大学

摘要:本发明公开了一种胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化工艺及其应用。本发明中,密度梯度离心法能够有效地将胰岛细胞与其他细胞分离开来。由于不同细胞的密度不同,梯度离心溶液能够创建一个密度梯度,使得胰岛细胞在梯度中特定的位置集中,从而提高胰岛细胞的纯度。梯度离心溶液对胰岛细胞具有较好的保护作用,能够减少在离心过程中由于机械力导致的细胞损伤。这种保护有助于维持胰岛细胞的活性和功能,为后续的胰岛移植提供高质量的细胞。通过密度梯度离心法获得的较高纯度的胰岛细胞,可以减少移植后免疫排斥反应的发生,提高胰岛移植的成功率。

主权项:1.一种胰岛移植中胰岛分离提纯的分离纯化工艺及其应用,其特征在于:所述工艺包括以下步骤:S1:供体胰腺的获取与保存:获取来源于器官捐献者新鲜的供体胰腺;S2:将胰腺置于无菌的UW液保存液中以保持胰岛细胞的活性;S3:进行胰腺的清洗与消化:使用无菌的生理盐水冲洗胰腺,去除血块和其他杂质;S4:使用胶原酶和蛋白酶抑制剂的混合溶液对胰腺进行消化,以分离胰岛细胞;S5:进行胰岛的筛选与纯化:通过离心法将消化后的胰腺细胞悬液分离成重、轻两层,胰岛细胞位于轻层;S6:使用密度梯度离心法进一步纯化胰岛细胞,以去除其他细胞和杂质,通过细胞筛网过滤,如400微米的筛网,以去除较大的组织碎片;S7:进行胰岛的洗涤与培养,使用无菌的生理盐水或培养液洗涤纯化后的胰岛细胞,以去除残留的消化酶和细胞碎片;S8:将胰岛细胞转移到含有营养培养基的培养皿中,如RPMI1640或DMEM,以促进细胞的存活和增殖;S9:进行胰岛的活性评估与计数:使用台盼蓝染色法或其他细胞活性染色法评估胰岛细胞的存活率;使用显微镜和细胞计数板对胰岛细胞进行计数,以确保移植所需的最小胰岛数量;S10:进行胰岛的移植,将洗涤后的胰岛细胞悬浮在含有抗生素的生理盐水中,以防止感染,通过注射器将胰岛细胞移植到受体的门静脉或肝脏中,或通过腹腔镜手术进行胰岛移植。

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