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申请/专利权人:河南赛诺特生物技术有限公司
摘要:本发明涉及一种免疫组化联合弹性纤维多重染色试剂盒、染色方法及应用。本发明提供的试剂盒包括如下组分:抗原修复液、维多利亚蓝染液、过氧化物酶封闭剂、一抗试剂、二抗试剂A、二抗试剂B、DAB显色底物、DAB显色缓冲液、HRP‑Blue底物、HRP‑Blue底物缓冲液液、苏木素复染液;其中,所述一抗试剂为主要由抗体A和抗体B组成的混合抗体,所述抗体A为鼠单克隆抗体,所述抗体B为兔单克隆抗体;所述二抗试剂A为HRP酶标记的羊抗鼠聚合物;所述二抗试剂B为HRP酶标记的羊抗兔聚合物。本发明还提供了具体染色方法。本发明的试剂盒及染色方法首次将免疫组化双重染色和弹性纤维染色有机结合,简化染色程序,提高检测效率,对组织样本的需求量显著降低。
主权项:1.一种免疫组化联合弹性纤维多重染色方法,其特征在于:包括如下步骤:1)脱蜡和水化:由二甲苯到无水乙醇,再到95%、85%、75%梯度乙醇浸泡,至水化;2)抗原修复;所述抗原修复为高压修复法或微沸修复法;3)弹性纤维染色:95%乙醇稍洗,维多利亚蓝染液常温孵育1小时;4)分化:95%乙醇快速浸洗至无多余染液;5)纯化水浸泡,冲洗;6)加过氧化物酶封闭剂,室温下孵育5min,清洗液洗涤;7)加一抗试剂,室温孵育60min,清洗液洗涤;8)加二抗试剂A,室温孵育30min,清洗液洗涤,所述二抗试剂A为HRP酶标记的羊抗鼠聚合物;9)DAB显色:加入新鲜配制的DAB染色液,室温孵育5~10min,纯化水冲洗;10)加二抗试剂B,室温孵育30min,清洗液洗涤,所述二抗试剂B为HRP酶标记的羊抗兔聚合物;11)HRP-Blue显色:加入新鲜配制的HRP-Blue染色液,室温孵育5~10min,纯化水冲洗;12)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
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