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申请/专利权人:北京清谱科技有限公司
摘要:本申请涉及分析化学的技术领域,具体公开了一种脂质精细结构分析流程和控制处理系统。该分析流程为:利用液相色谱分离‑一级质谱对样品进行检测,结合脂质保留时间信息,确定脂质亚类信息,并确定下一步液相色谱‑质谱采集方法;利用液相色谱分离‑二级质谱对样品进行检测,确定脂肪酸链组成,并确定下一步液相色谱‑质谱采集方法;利用液相色谱分离‑光化学衍生‑二级质谱对光化学衍生产物进行检测,确定脂质中碳碳双键的位置;并根据不饱和脂质光化学衍生产物的质谱碎片强度比或强度和之比,确定脂质碳碳双键位置异构体的相对定量信息。且该分析流程须由人员操作控制处理系统执行。本申请能够确定不饱和脂质中碳碳双键位置和相对定量信息。
主权项:1.一种脂质精细结构分析方法,其特征在于,所述分析方法具体包括以下步骤:(1)利用液相色谱分离-一级质谱对样品进行检测,获得一级质谱图;解读一级质谱图的数据,获得脂质一级质谱的精确离子质荷比;根据获得的精确离子质荷比,与数据库A比对,结合脂质保留时间信息,确定脂质亚类信息,并根据脂质亚类信息,确定下一步液相色谱-质谱采集方法;(2)根据步骤(1)确定的液相色谱-质谱采集方法,利用液相色谱分离-二级质谱对样品进行检测,获得二级质谱图;解读二级质谱图的数据,获得脂质二级质谱的精确离子质荷比;根据获得的精确离子质荷比,与数据库B比对,确定脂肪酸链组成,并根据脂肪酸链组成,确定下一步液相色谱-质谱采集方法;(3)根据步骤(2)确定的液相色谱-质谱采集方法,利用液相色谱分离-光化学衍生-二级质谱对光化学衍生产物进行检测,获得光化学衍生-二级质谱图;解读光化学衍生-二级质谱图的数据,获得光化学衍生产物的二级质谱的精确离子质荷比;根据获得的精确离子质荷比,与数据库C比对,确定脂质中碳碳双键的位置;并根据不饱和脂质光化学衍生产物的质谱碎片强度比或强度和之比,确定脂质碳碳双键位置异构体的相对定量信息;所述步骤(3)中用到的光化学衍生试剂混合在流动相中,可实现在线衍生和检测;所述步骤(3)中的光化学衍生的波长为190-760nm;所述光化学衍生试剂与所述样品的摩尔比为1×10-9~1×109;所述步骤(3)中的光照反应时间为0.1~1200s;所述分析方法使用自动模式或辅助手动模式中的任意一种;所述自动模式下,技术方案中所有操作均可自动实现,包括样品检测方法自动创建和触发运行、仪器控制,以及含有结果比对、分析、确定和输出的数据自动解析;所述辅助手动模式支持全流程引导、二级质谱采集方法参数生成和数据自动解析,仅流程方法创建与触发运行需要手动操作;当分析方法使用的是辅助手动模式时,全流程引导过程会提供流程方法的参数,包括二级质谱的前体离子信息,从而辅助工作人员创建流程方法;所述数据库A、所述数据库B、所述数据库C指向含有所需对应信息的同一数据库或不同数据库;当所述数据库A、所述数据库B、所述数据库C指向同一数据库时,该数据库包含脂质的保留时间、脂质光化学衍生产物的保留时间、脂质的一级质谱精确离子质荷比、脂质光化学衍生产物的一级质谱精确离子质荷比、脂质的二级质谱精确离子质荷比、脂质光化学衍生产物的二级质谱精确离子质荷比、脂质的三级质谱精确离子质荷比、脂质光化学衍生产物的三级质谱精确离子质荷比;当所述数据库A、所述数据库B、所述数据库C指向不同数据库时,三个数据库分别包含其所需的对应信息;所述样品为虫草;在分析之前,对样本进行预处理,具体步骤如下:取市售虫草,粉碎后过200目筛,取粉末,加入体积比为2:1且0℃的CH2Cl2-CH3OH混合溶剂,涡旋并静置,加入水,离心后移取有机相氮气吹干,加入体积比为1:1的乙腈-异丙醇混合溶剂复溶,离心后取上清,获得样品处理液;所用的色谱系统的条件为:ACQUITYUPLCI-Class;色谱柱:ACQUITYUPLCHILIC,尺寸为100×2.1mm,直径为1.7μm;流动相A为体积比为53的丙酮乙腈,流动相B为浓度为10mM的乙酸铵水溶液,流速:0.4mLmin;梯度洗脱:0min88%A,0.5min85%A,2.5min85%A,4.5min88%A,6min88%A;进样体积1μL;柱温:30℃;所用的质谱系统的条件为:WatersXevoG2-XSQTOF;采集模式:灵敏度模式ESI+,MSE,毛细管电压:2.5kV;锥孔电压:40V;源温度:120℃;雾化气温度:500℃;雾化气流速:800Lh;锥孔气流速:50Lh;采集质量范围:50-1200;Lockmass:亮氨酸脑啡肽400ngmL;扫描时间:0.2s;碰撞能量:LowCE6eV,HighCE10-45eV。
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