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申请/专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所

摘要：本发明公开了生产丁酸的重组大肠杆菌的构建方法。本发明涉及生物技术领域，具体涉及生产丁酸的重组微生物及其构建方法，向微生物中导入3‑羟基丁酰CoA脱氢酶编码基因hbd、巴豆酸酶编码基因Crt、反式‑2‑烯酰CoA还原酶编码基因ter、RBSL1启动子和M1‑93启动子，RBSL1启动子调控反式‑2‑烯酰CoA还原酶编码基因ter的表达，M1‑93启动子调控酰基CoA转移酶编码基因atoB的表达，使得所述酶活性增强；通过以上构建方法构建得到的重组大肠杆菌经过驯化，获得重组大肠杆菌NZ‑B018，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.25496，采用NZ‑B018进行发酵，可以提高大肠杆菌生产丁酸的产量和产率。

主权项：1.重组大肠杆菌，其特征在于：所述重组大肠杆菌通过敲除大肠杆菌ATCC8739的乳酸脱氢酶基因、甲基乙二醛合酶基因、丙酸激酶基因、甲酸乙酰转移酶基因、醇脱氢酶基因、乙酸激酶基因和富马酸还原酶基因；并将巴豆酸酶基因整合于醇脱氢酶基因位点；将3-羟基丁酰CoA脱氢酶基因整合于乙酸激酶基因位点、将反式-2-烯酰CoA还原酶基因整合于富马酸还原酶基因位点获得；所述重组大肠杆菌含有酰基硫脂酶基因表达盒，所述酰基硫脂酶基因表达盒含有P*tesB启动子和所述P*tesB启动子驱动的所述酰基硫脂酶基因；所述P*tesB启动子为一条链的核苷酸序列为序列表中序列1的DNA分子；所述重组大肠杆菌含有反式-2-烯酰CoA还原酶基因表达盒，所述反式-2-烯酰CoA还原酶基因表达盒含有RBSL1启动子和所述RBSL1启动子驱动的所述反式-2-烯酰CoA还原酶基因；所述RBSL1启动子为一条链的核苷酸序列为序列表中序列2的DNA分子；所述重组大肠杆菌含有酰基CoA转移酶基因表达盒，所述酰基CoA转移酶基因表达盒含有M1-93启动子和所述M1-93启动子驱动的所述酰基CoA转移酶基因；所述M1-93启动子为一条链的核苷酸序列为序列表中序列3的DNA分子；所述乳酸脱氢酶基因的核苷酸序列为Genbank号NC_010468的第2508048-2509037位，更新日期为27日1月2012年；所述甲基乙二醛合酶基因的核苷酸序列为Genbank号NC_010468的第2883345-2883803位，更新日期为27日1月2012年；所述丙酸激酶基因的核苷酸序列为Genbank号NC_010468的第626900-628108位，更新日期为27日1月2012年；所述甲酸乙酰转移酶基因的核苷酸序列为Genbank号NC_010468的第628142-630436位，更新日期为27日1月2012年；所述巴豆酸酶基因的核苷酸序列是Genbank号为AE001437的第2835666-2836451位，更新日期为30日1月2014年；所述醇脱氢酶基因的核苷酸序列是Genbank号为NC_010468的第2627307-2629982位，更新日期为27日1月2012年；所述3-羟基丁酰CoA脱氢酶基因的核苷酸序列是Genbank号为CP030018的第437865-438713位，更新日期为19日6月2018年；所述乙酸激酶基因的核苷酸序列是Genbank号为NC_010468的第1486251-1487453位，更新日期为27日1月2012年；所述反式-2-烯酰CoA还原酶基因的核苷酸序列是Genbank号为AE017226的第636109-637302位，更新日期为31日1月2014年；所述富马酸还原酶基因的核苷酸序列是Genbank号为NC_010468的第4214758-4218069位，更新日期为27日1月2012年；所述酰基CoA转移酶基因的核苷酸序列是Genbank号为NC_010468的第1569227-1570411位，更新日期为27日1月2012年。

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百度查询： 中国科学院天津工业生物技术研究所 生产丁酸的重组大肠杆菌及其构建方法