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申请/专利权人：北京艺妙神州医药科技有限公司
摘要：本发明涉及用于CAR‑T疗法的T细胞中的TRAC和B2M双重敲除。具体而言，本发明涉及具有较高敲除效率的靶向TRAC和B2M的sgRNA序列及其使用方法。更具体地，本发明提供一种sgRNA套组，其包含：核苷酸序列如序列3、6、9、12、14、15、16、18和19任一所示的靶向B2M基因的sgRNA，和核苷酸序列如序列37和41任一所示的靶向TRAC基因的sgRNA。另一方面，本发明提供一种生成TRACB2M双阴性T细胞的方法，其包括：使用本发明的sgRNA套组处理T细胞，使得其中的B2M基因和TRAC基因被敲除。
主权项：1.一种生成TRACB2M双阴性T细胞的方法，其包括：使用sgRNA套组处理T细胞，使得其中的B2M基因和TRAC基因被敲除；进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之后，在分选TRACB2M双阴性细胞之后扩充TRACB2M双阴性细胞，其中使用sgRNA套组处理T细胞通过RNP复合物电转Cas9蛋白和所述sgRNA套组来进行，其中在每100μL电转体系中，sgRNA用量为每种2.5～9μg，Cas9蛋白用量为5～10μg，T细胞用量为7.5E+06～2.0E+07个，其中所述sgRNA套组包含：核苷酸序列如序列18所示的靶向B2M基因的sgRNA和核苷酸序列如序列37所示的靶向TRAC基因的sgRNA；其中，所述方法进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之前，使用编码CAR多肽的核酸处理T细胞，使得CAR多肽在T细胞表面表达。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京艺妙神州医药科技有限公司 用于敲除T细胞中的TRAC和B2M的试剂和方法
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