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申请/专利权人：宁波中盛产品检测有限公司;宁波海关技术中心;宁波检验检疫科学技术研究院(宁波国检贸易便利化服务中心)

摘要：本发明公开一种通过富集蛋白质提升检测灵敏度的电化学检测方法，包括以下步骤：S1、制备电化学免疫传感器；聚多巴胺生成于预置在工作电极表面的修饰层并将修饰层粘接在工作电极表面；分散并固定抗体；S2、将待检测浓度酸性蛋白质滴加于吸附有碱性电解液的修饰层，静置，待检测的蛋白质分散在修饰层，修饰层中的石墨烯吸附酸性蛋白质富集，与抗体接触形成特异性吸附；S3、测试交流阻抗谱，根据工作电极的电荷转移电阻‑蛋白质浓度的线性方程计算得到待检测酸性蛋白质的浓度；本发明通过交流阻抗谱检测电荷转移电阻，定量检测蛋白质的浓度，检测过程稳定，降低了非特异性吸附，利于工作电极稳定地反复使用。

主权项：1.一种通过富集蛋白质提升检测灵敏度的电化学检测方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、制备电化学免疫传感器；S11、在工作电极表面通过电化学聚合反应原位生成聚多巴胺，聚多巴胺生成于预置在工作电极表面的修饰层，修饰层通过聚多巴胺粘接在工作电极表面；S11中聚多巴胺生成于预置在工作电极表面修饰层的制备方法包括以下步骤：S111、将氧化镁颗粒石墨烯以及氧化石墨混合均匀并搅拌得膏状物涂覆在玻碳电极表面，烘干，得预定位附着在工作电极表面的氧化镁颗粒石墨烯以及氧化石墨烯层；S112、将包含有S111所得表面预附着有氧化镁颗粒石墨烯以及氧化石墨烯层的工作电极的三电极体系置于溶解有多巴胺的电解液中，电解液的pH值为7.4至7.8，通入氮气去除电解液中的氧气；S113、使用循环伏安法将电解液中的多巴胺原位聚合在电极表面的氧化镁颗粒石墨烯以及氧化石墨烯层，在电化学聚合过程中，石墨烯表面的氧化镁颗粒作为碱中心催化多巴胺在石墨烯表面聚合并将修饰层通过聚多巴胺粘接在工作电极表面；S12、修饰层涂覆有5μL的抗体-磷酸盐缓冲溶液，其中抗体的浓度为0.2mgml,抗体受到石墨烯的吸附作用均匀分散于修饰层；S13、将经过S12的工作电极置于37℃培养箱中温育30min,得吸附有抗体的电极；S14、将5μL浓度为5％的聚乙二醇6000滴加在经过S13的修饰层表面固定抗体；S2、将待检测浓度酸性蛋白质滴加于吸附有碱性电解液的修饰层，静置，待检测的蛋白质分散在修饰层，修饰层中的石墨烯吸附酸性蛋白质富集，在电解液和修饰层界面处受到氧化镁颗粒的碱性作用呈电负性的酸性蛋白质与修饰层中在碱性电解液中带负电荷的石墨烯相互排斥从而导致酸性蛋白质在修饰层与电解液的界面处均匀分布，抗原与抗体接触形成特异性吸附；S3、置于碱性电解液中三电极体系实施EIS测量，所述三电极体系包括形成特异性吸附的工作电极、作为对电极的铂电极以及作为参比电极的饱和甘汞电极；根据所得交流阻抗谱获得电荷转移电阻，根据工作电极的电荷转移电阻-蛋白质浓度的线性方程计算得到待检测酸性蛋白质的浓度。

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