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申请/专利权人：中科之光生物科技(河北省)有限公司

摘要：本发明公开了一种可耐受辐照灭菌的活性注射凝胶的制备方法。该活性注射凝胶由动物来源提取的胶原蛋白凝胶、脱细胞真皮基质微粒、细菌纤维素、甘油、氨基酸按照一定比例复合，起到外源性填充和内源性胶原蛋白再生作用的填充材料。通过甘油及氨基酸保护，并由液氮或干冰进行低温封装的方式，能够使胶原凝胶通过Co60辐照灭菌后仍保持其活性和凝胶性状，并达到无菌和病毒灭活的效果，并通过脱细胞真皮基质微粒和细菌纤维素的加入，提高注射力并有效延长纯胶原蛋白凝胶的作用时间，达到长效的目的。

主权项：1.一种可耐受辐照灭菌的活性注射凝胶的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：1选取新鲜牛皮，除去表面脂肪、碎肉，纯净水浸泡去除血液，洗净、切块，组织粉碎机中粉碎，粉碎组织用去离子水清洗，并用75％乙醇浸泡18-30h，去离子水洗净，再将粉碎组织置于去离子水中，用0.005-0.015N盐酸加入胃蛋白酶，23-27℃酶解40-60h后，离心机离心收集上清液，用1-3MNaOH调至中性，以饱和NaCl盐析8-12h，离心，沉淀对去离子水透析，获得胶原蛋白凝胶；2选取新鲜牛皮，取皮，去除表皮层、真皮乳头层和皮下脂肪，剩余中间真皮网状层，厚度为0.5-1.2mm，置于胰蛋白酶溶液中，于35-39℃震荡处理1-3h后，用纯化水洗涤3-5次，20min次；3将步骤2处理后的基质于0.5-1.5MNaOH溶液中，23-27℃震荡处理0.5-1.5h后，用纯化水洗涤2-4次，10min次；4将步骤3处理后的基质置于0.05-0.15％SDS溶液中，23-27℃震荡处理0.5-1.5h后，用0.005-0.015MPBS溶液超声洗涤2-4次，10min次；5将步骤4处理后的基质置于TritonX-100溶液中，23-27℃震荡处理3-5h后，用0.005-0.015MPBS溶液超声洗涤4-6次，10min次，再用纯化水洗涤2-4次，20min次；6将步骤5处理后的基质放入储料管，置于研磨仪中研磨，研磨结束取出并打开储料管，获得脱细胞真皮基质微粒；7将胶原蛋白凝胶、脱细胞真皮基质微粒、细菌纤维素、甘油、氨基酸混合均匀，减压脱泡后灌入注射器中；8将注射器置于带有夹层的保温箱中，保温箱夹层中放入干冰或者液氮，放置完毕将保温箱闭合，进行Co60辐照，辐照剂量15-35KGy，辐照时间6-10h。

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