买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：浙江省农业科学院

摘要：本发明公开一种多杀性巴氏杆菌外膜囊泡的制备方法及其应用，包括下述步骤：将多杀性巴氏杆菌划线接种于马丁肉汤固体培养基平板上进行培养；取预培养菌液的上清液，离心，过滤，将滤液收集到超滤器中浓缩，浓缩液超速离心，弃上清液，沉淀用PBS缓冲液重悬，于‑80℃条件下冻存；先制备氨基修饰的介孔二氧化硅纳米粒使其带正电；将二氧化硅分散液与石斛多糖在室温下剧烈搅拌后，离心处理水洗，即得介孔二氧化硅载石斛多糖；用微型挤出机对介孔二氧化硅载石斛多糖和外膜囊泡行挤压，然后灭菌，得到多杀性巴氏杆菌外膜囊泡。本发明制得的外膜囊泡包裹介孔二氧化硅载石斛多糖可以产生强大而持久的抗菌免疫力。

主权项：1.一种多杀性巴氏杆菌外膜囊泡的制备方法，其特征在于包括下述步骤：（1）外膜囊泡的制备将多杀性巴氏杆菌划线接种于马丁肉汤固体培养基平板上进行培养，然后挑取单菌落接种于马丁肉汤培养基中进行培养，扩大培养后得预培养菌液；取预培养菌液的上清液，超速离心，过滤，将滤液收集到超滤器中浓缩，浓缩液超速离心，弃上清液，沉淀用PBS缓冲液重悬，于-80℃条件下冻存；（2）介孔二氧化硅载石斛多糖纳米颗粒的合成将介孔二氧化硅分散于甲苯中，超声中加入APTES反应，离心收集沉淀，沉淀用乙醇和ddH2O分别洗涤数次后，分散于ddH2O中，得到氨基修饰的介孔二氧化硅纳米粒使其带正电；将二氧化硅分散液与石斛多糖在室温下剧烈搅拌后，离心处理，水洗两次，即得介孔二氧化硅载石斛多糖；（3）外膜囊泡包裹介孔二氧化硅载石斛多糖的合成：用装有0.2μm聚碳酸酯薄膜过滤膜的微型挤出机对介孔二氧化硅载石斛多糖和外膜囊泡挤压数次进行结合，得到多杀性巴氏杆菌外膜囊泡DP-MSN-OMV；步骤（2）中，介孔二氧化硅的制备方法如下：将十六烷基三甲基甲苯磺酸铵、三乙醇胺、ddH2O混合后加热至80℃，搅拌1h至完全溶解，快速加入正硅酸四乙酯，在80℃的条件下反应2h，然后离心收集沉淀，沉淀使用ddH2O和乙醇交替洗3次后分散于乙醇中，即得二氧化硅；将分散于乙醇中的二氧化硅，加入到乙醇和盐酸溶液中，70℃反应12h，离心收集沉淀，使用ddH2O和乙醇交替洗3次后，甲苯洗2次后沉淀分散于甲苯中，得到介孔二氧化硅；乙醇和盐酸溶液中乙醇和盐酸的体积比为：（8-12）：1；步骤（2）中，加入APTES反应条件为：在N2保护下，80℃反应12h。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江省农业科学院 一种多杀性巴氏杆菌外膜囊泡的制备方法及其应用