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申请/专利权人：厦门大学
摘要：本发明涉及一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用，通过构建厌氧调控的强启动子表达系统，在沼泽红假单胞菌内高效表达内源阿魏酰辅酶A合成酶CouB和烯酰辅酶A水合酶醛缩酶CouA及外源醇脱氢酶ADH2，构建香草醇生物合成路径。该重组光合细菌，以木质素单体阿魏酸为底物，硫代硫酸钠为电子供体，经过光催化高效生产香草醇；无需额外添加有机碳源，具有广阔的工业化应用前景。
主权项：1.一种高产香草醇的光合细菌构建方法，其特征在于，包括以下步骤：构建厌氧调控的强启动子表达载体pBRPt334O和pGenPt334O；所述表达载体pBRPt334O的构建是以核苷酸序列为SEQIDNO：25所示的启动子PT334-6为模板，以SEQIDNO：1、SEQIDNO：2所示序列为引物，PCR扩增得到厌氧调控的强启动子PT334O，将其连接入载体pBRT，获得具有卡那霉素抗性的表达载体pBRPt334O；所述表达载体pGenPt334O的构建是以pZJD29a质粒为模板，以SEQIDNO：4、SEQIDNO：5所示序列为引物，PCR扩增得到庆大霉素抗性基因，经抗生素筛选标记替换，获得具有庆大霉素抗性的表达载体pGenPt334O构建表达阿魏酰辅酶A合成酶CouB、烯酰辅酶A水合酶醛缩酶CouA的质粒pBRT334O-CouBA和表达醇脱氢酶ADH2的质粒pGenT334O-ADH2；所述质粒pBRT334O-CouBA的构建是以沼泽红假单胞菌基因组为模板，分别以SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8、SEQIDNO：9所示的序列为引物，经PCR扩增得到CouB基因和CouA基因，再将两基因克隆至表达载体pBRPt334O，获得质粒pBRT334O-CouBA；敲除沼泽红假单胞菌中的醛脱氢酶，并将质粒pBRT334O-CouBA和质粒pGenT334O-ADH2结合转移导入沼泽红假单胞菌中，以获得高产香草醇的光合细菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 厦门大学 一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用
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