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申请/专利权人：新疆医科大学

摘要：本发明提供一种基于突变适配体的快速检测食品中残留甲硝唑的方法，该方法通过对甲硝唑现有的适配体5'‑CTGTTTGGTAGGCAG‑3'进行单碱基突变以改善其空间结构以及与靶标之间的相互作用力，从而得到新型适配体—Apt1‑3：5‑'CTGTTTGCTACGCAG‑3'，并将得到的适配体与金纳米粒子结合构建比色传感器，通过智能手机上的取色软件1.2.2版的FColorPicker拍摄待测量区域的图像，可以识别图像色调的细微差异，并通过确定样品浓度与色度值之间的线性或非线性关系来达到快速检测的目的。为了避免环境对取色的影响，设计了3D暗盒，在不借助仪器的情况下检测限为0.15nmolmL，该方法在实时检测平台中具有重要价值。

主权项：1.一种基于突变适配体的快速检测食品中残留甲硝唑的方法，其特征在于，按下列步骤进行：制备适配体：a、首先将甲硝唑适配体序列中的A碱基突变成G碱基，T碱基突变成C碱基，然后通过二级结构分析和三维分子对接，对适配体突变前后的结合能和结构特性进行了对比并用纳米金比色法验证甲硝唑与适配体的结合亲和力；b、将步骤a中的甲硝唑适配体序列中的G碱基突变成C碱基，C碱基突变成G碱基，再通过二级结构分析和三维分子对接，对适配体突变前后的结合能和结构特性进行了对比并用纳米金比色法验证甲硝唑与适配体的结合亲和力，得到5'端的第八个碱基G突变成C碱基时，其亲和力增加了；5'端的第十一个碱基G突变成C碱基时，亲和力增加；c、将步骤b的第八个碱基G和第十一个碱基G同时突变成C碱基得到新的适配体Apt1-3：5'-CTGTTTGCTACGCAG-3'，再通过二级结构分析和三维分子对接，对适配体突变前后的结合能和结构特性进行了对比,并用纳米金比色法、氧化石墨烯荧光法、核酸外切酶法对其亲和力进行表征；得到了更高亲和力的适配体Apt1-3：5-'CTGTTTGCTACGCAG-3'；将适配体Apt1-3检测甲硝唑：纳米金的合成：d、通过柠檬酸钠还原HAuCl4合成金纳米粒子，将10mL柠檬酸钠溶液38.8mM迅速注入100mL沸腾的HAuCl41mM溶液中，剧烈搅拌，在搅拌过程中持续加热10分钟，停止加热并再持续搅拌10分钟，将得到的酒红色溶液冷却至室温，然后保存在深色玻璃瓶中，温度为4℃备用；e、将步骤d得到的体积为300μL的纳米金与200μL步骤c得到的适配体Apt1-3：5-'CTGTTTGCTACGCAG-3'0.06μM在温度25℃下孵育5min，再注入200µL浓度分别为6.7μM、13.3μM、20.0μM、26.7μM、33.3μM、44.4μM的的甲硝唑溶液，在温度25℃下反应25min，加入200µL40mMNaCl混合均匀；f、将步骤e制备好的甲硝唑溶液置于样品板（3）中，将样品板（3）放在3D暗盒内的样品板的放置盒（5）底部的LED灯带（4）上，样品板（3）与T型手柄（7）上的天窗（1）对应，将智能手机放置在3D暗盒的顶部T型手柄（7）上，智能手机摄像头对准暗盒顶部的天窗（1），打开智能手机上1.2.2版的取色软件FColorPicker，打开该软件的取色器拍摄功能，点击取色器的对准箭头使摄像头对准样品板（3）里的样品，然后点击拍摄按钮，该软件分别给出G和R的值，直接读取G和R的值，用GR值表征甲硝唑的含量，并建立了线性范围，计算检出限0.15nmolmL。

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百度查询： 新疆医科大学 一种基于突变适配体的快速检测食品中残留甲硝唑的方法