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申请/专利权人：江苏香地化学有限公司
摘要：本发明公开了一种生产胞二磷胆碱的方法，属于基因工程和微生物工程领域。本发明通过基因编辑技术敲除宿主细胞基因组上的dCTP脱氨酶基因dcd、磷酸核苷激酶基因ndk、核糖核苷三磷酸还原酶基因nrdD和或三磷酸核苷焦磷酸水解酶基因mazG，并过量表达磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT和胆碱激酶基因CKI，并敲除宿主细胞基因组上的肽聚糖糖基转移酶基因mtgA，并将酿酒酵母来源的ScCCT酶进行定点突变提高酶活力，构建获得的重组大肠杆菌的胞二磷胆碱发酵水平可达28.3gL以上。这种高效的重组菌株可用于实现胞二磷胆碱的工业化生产，利于降低其生产成本及环境污染，实现绿色生物制造。
主权项：1.一种生产胞二磷胆碱的重组菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主细胞，敲除基因组上的dCTP脱氨酶编码基因dcd、磷酸核苷激酶编码基因ndk、核糖核苷三磷酸还原酶编码基因nrdD和三磷酸核苷焦磷酸水解酶编码基因mazG，并过量表达磷酸胆碱胞苷酰转移酶编码基因CCT和胆碱激酶编码基因CKI；所述过量表达为将编码基因CCT和编码基因CKI整合至大肠杆菌基因组上；所述重组菌在yhdE位点整合编码基因CKI，在poxB位点整合编码编码基因CCT；所述磷酸胆碱胞苷酰转移酶编码基因CCT的氨基酸序列为：在SEQIDNO.10的基础上将第111位的缬氨酸Val突变为丙氨酸Ala；所述重组菌还敲除了肽聚糖糖基转移酶编码基因mtgA。
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百度查询： 江苏香地化学有限公司 一种生产胞二磷胆碱的方法
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