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申请/专利权人：华南师范大学

摘要：本发明公开了一种快速评估双酚类化合物神经毒性的方法，该方法选择可能介导新型双酚类发挥更强雌激素效应的G蛋白偶联雌激素受体为靶点，构建GPER‑磷脂膜模型，通过分子对接和分子动力学模拟，从分子和原子水平比较BPs与G1在GPER结合袋中的构‑效关系，包括：分析模拟过程中的RMSD、RMSF、BPs与GPER结合的相互作用能强弱以及形成氢键的占有率，比较BPs和G1与GPER结合的高频构象以及导致的GPER主链原子动态变化的特征来综合分析BPs作为GPER激动剂从而引起神经毒性效应的潜能。体外细胞实验证实GPER受体确实介导了BPs化合物的神经毒性反应，说明本发明方法是可行的。

主权项：1.一种评估双酚类化合物神经毒性的方法，其特征在于包括以下步骤：1以人源GPER的蛋白序列信息构建GPER蛋白质模型；2构建磷脂膜模型，对其进行分子动力学模拟使达到平衡；3构建步骤1GPER蛋白质模型的拓扑，然后使用GROMACS的membed工具，将步骤1GPER蛋白质模型锚定在步骤2磷脂膜模型中，得到POPC膜-GPER复合物；使用SPC水模型将POPC膜-GPER复合物溶剂化，并中和体系中的电荷，再进行分子动力学模拟使其达到平衡和优化，得到膜-GPER体系；4绘制BPs和G1的3D图像，并进行能量最小化的优化；5计算GPER受体、BPs和G1配体的Gasteiger电荷，随后设置格点盒子，使其覆盖整个GPER结合口袋，格点间距为然后使用Autodock中的Lamarckian遗传算法进行步骤3优化所得GPER结构与配体的对接计算；以具有最佳结合能和出现频率最多的配体构象作为配体起始构象；6将配体起始构象生成配体拓扑文件；将各个配体的起始构象放入步骤3所得的膜-GPER体系中，得到配体-GPER体系，对其进行能量最小化处理和预平衡，然后使用Gromacs程序进行至少550ns的MD模拟；所述的MD模拟分析，在具有周期性边界条件进行，在310K和1bar压力下进行，时间步长设置为2.0fs，并且每1ps保存一次坐标；7MD模拟结束后，计算各配体-GPER体系中GPER的均方根偏差和均方根波动；利用聚类分析方法提取高频的配体-GPER体系，观察其构象和特征；计算最后150ns模拟分析中各个配体-GPER体系氢键占有率和分子力学相互作用能；对MD模拟最后150ns的原子轨迹变化进行主成分分析；综合步骤7的结果，当BPs与GPER形成的复合物具有RMSD值随模拟逐渐收敛，RMSF中各氨基酸残基波动程度与G1相似，BPs-GPER复合物的高频结合构象与G1-GPER复合物相似，BPs与GPER形成的复合物具有稳定的氢键连接和强分子间相互作用力，且主成分分析显示BPS-GPER主链原子位置变化与G1-GPER结合体系相似时，推断BPs与G1一样对GPER具有激动活性，会对神经系统产生毒性作用。

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