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申请/专利权人：中国石油大学(华东)

摘要：本发明涉及一种靶向肝癌细胞的pH和GSH双响应型纳米药物载体及其制备方法。采用自制的亲水性含半乳糖聚合物作为可逆加成‑断裂链转移RAFT反应大分子链转移剂或原子转移自由基聚合ATRP反应大分子引发剂，通过12‑冠醚‑4辅助的无皂乳液活性聚合制备得到具有核壳结构且粒径小于100nm的纳米载体，壳层聚合物链上的半乳糖基团可以主动靶向肝癌细胞，核层进一步水解后得到pHGSH双响应型纳米药物载体。该纳米载体可以作为冻干粉储存，纳米载体的尺寸不仅有助于细胞的内吞，而且核层和壳层都具有独特的功能：壳层聚合物链上的半乳糖基团会主动识别肝癌细胞表面过度表达的去唾液酸蛋白ASGP受体，实现纳米药物载体主动靶向肝癌细胞功能；核层的聚甲基丙烯酸在pH值呈酸性的肿瘤部位会由溶胀状态迅速收缩，同时肿瘤细胞内的GSH会将核层的二硫键交联剂迅速降解，两者协同作用使包埋的药物迅速释放出来。该纳米药物载体在药物控释特别是恶性肝癌化疗方面具有很大应用潜力。

主权项：1.一种靶向肝癌细胞的pHGSH双响应型载药纳米球的制备方法，其特征在于步骤包括：1以带双键含半乳糖单体作为聚合单体，采用RAFT或ATRP反应聚合制备线性聚合物，反应温度10-100℃；反应时间为0.5-24h；单体浓度为0.1-10M；含半乳糖单体为6-O-甲基丙烯酰基-双丙酮-D-半乳糖、6-O-丙烯酰基-双丙酮-D-半乳糖中的至少一种；反应溶剂为甲苯、二甲苯、苯、溴苯、氯苯、二氧六环、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺中的一种；对于RAFT反应，引发剂与RAFT试剂的摩尔比范围为0.05-2.0之间，引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、过氧化苯甲酰、过氧化苯甲酰叔丁酯中的至少一种，RAFT试剂为4-氰基-4-苯基硫代甲酰硫基戊酸CPADB、2-氰基-2-丙基苯并二硫CPDB、二硫代苯甲酸枯酯CDB、中的一种；对于ATRP反应，单体与ATRP引发剂的摩尔比范围10:1-200:1，催化剂的加入量与引发剂相同，配体的加入量为催化剂的0.5-3倍，引发剂为2-溴异丁酸乙酯、2-溴丙酸甲酯中的至少一种，配体为N,N,N,N’,N’-五甲基二亚乙基三胺PMDETA、三[2-二甲基氨基乙基]胺Me6TREN中的至少一种，催化剂为CuBr、CuCl中的至少一种；反应结束后，用四氢呋喃或者三氯甲烷稀释反应产物，对于ATRP反应，还需要将产物通过氧化铝柱除去催化剂，得到的溶液在正己烷、环己烷或石油醚中沉淀两次，离心后，所得高分子真空干燥后进入步骤2；2将步骤1得到的聚合物进行酸解，利用强酸的水溶液，室温下与聚合物混合搅拌0.5-24h，透析冻干后得到含半乳糖的亲水聚合物作为RAFT反应大分子链转移剂或ATRP反应大分子引发剂；3将甲基丙烯酸叔丁酯和含二硫键交联剂混合均匀得到油相，所述含二硫键交联剂为N,N’-双丙烯酰胱胺、N,N’-双甲基丙烯酰胱胺、2,2-二硫二乙醇二丙烯酸酯、2,2-二硫二乙醇二甲基丙烯酸酯中的至少一种，交联度为5-50％；对于RAFT反应，需将引发剂、12-冠醚-4、步骤2得到的聚合物和去离子水在反应瓶中搅拌均匀得到水相，12-冠醚-4在水相中的摩尔浓度为1-50mM；对于ATRP反应，应将配体、催化剂、12-冠醚-4、步骤2得到的聚合物和去离子水在反应瓶中搅拌均匀得到水相，12-冠醚-4在水相中的摩尔浓度为1-50mM；油相质量占水相质量的1-20％，将油相和水相混合后通氮气除氧30min开始升温聚合，反应温度为40-85℃，反应时间1-48h，反应结束后将所得的纳米球溶液用透析袋透析24h，透析介质依次为无水乙醇和去离子水，目的是除去未参加反应的物质，然后将透析袋里的纳米球溶液用真空冻干机干燥，得到具有核壳结构的聚甲基丙烯酸叔丁酯纳米球冻干粉；4将步骤3所得的产品加入到90％的三氟乙酸水溶液中，室温下反应过夜脱除叔丁基保护，然后将反应混合物在去离子水中透析24h，将透析袋里的纳米球溶液用真空冻干机干燥，得到能够靶向肝癌细胞的pHGSH双响应型纳米球干粉；5将步骤4所得的纳米球干粉分散在药物的pH缓冲溶液中，药物的浓度范围10-2000μgml,pH缓冲液pH值范围6-8；药物分子通过静电作用吸附到载体上，室温下混合24h后通过离心分离得到载药纳米球。

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