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一种基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗及其制备方法和应用 

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申请/专利权人:上海大学

摘要:本发明提供了一种基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗及其制备方法和应用,属于生物制品技术领域。一种基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗,包括肽‑载体蛋白、DNA水凝胶和游离载体蛋白;肽‑载体蛋白通过杂交方式负载在DNA水凝胶中或者包裹在DNA水凝胶中;DNA水凝胶内部包裹游离载体蛋白;DNA水凝胶是由Y型支架和linkerDNA自组装而成。本发明提供的肽疫苗中载体蛋白快速释放,诱导CD4阳性T细胞活化,肽‑载体蛋白缓慢释放,从而达到B细胞致敏的同时,已有较多CD4+T细胞活化,进而有效活化B细胞,增强肽疫苗免疫效果。

主权项:1.一种基于DNA佐剂水凝胶的肽疫苗,其特征在于,包括肽-载体蛋白、DNA水凝胶和游离载体蛋白;所述肽-载体蛋白通过杂交方式负载在DNA水凝胶中;所述DNA水凝胶内部包裹游离载体蛋白;所述DNA水凝胶是由Y型支架和linkerDNA自组装而成;所述Y型支架由核苷酸序列SEQIDNO:1~SEQIDNO:3所示的DNA链组装得到;所述linkerDNA由核苷酸序列SEQIDNO:4~SEQIDNO:5所示的DNA链组装得到;所述肽-载体蛋白中肽为新型冠状病毒的S蛋白的RBD的S3和S4;所述S3的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示;所述S4的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示;所述肽-载体蛋白的制备方法包括以下步骤:将载体蛋白与DBCO-NHS震荡反应,除去未反应成分,向反应产物中加入肽进行冷冻反应;所述肽-载体蛋白中载体蛋白为BSA;所述BSA的浓度为100~102μM;所述DBCO-NHS的添加浓度为BSA摩尔浓度的28~32倍;所述肽的添加浓度为BSA摩尔浓度的5~15倍;所述冷冻反应的温度为-18~-22℃;所述冷冻反应的时间为10~14h;所述肽-载体蛋白中通过GOD-linker-N3与DNA水凝胶中的DNA链杂交;所述GOD-linker-N3的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示;接有GOD-linker-N3的肽-载体蛋白的制备方法,在制备所述肽-载体蛋白时向反应产物中加入肽的同时还加入GOD-linker-N3;所述GOD-linker-N3的添加浓度为BSA摩尔浓度的1~3倍;所述肽疫苗的制备方法,包括将游离载体蛋白和接有GOD-linker-N3的肽-载体蛋白与linkerDNA混合,再与Y型支架混合;所述游离载体蛋白、肽-载体蛋白、linkerDNA和Y型支架的摩尔比为(0.4~0.6):(0.4~0.6):(0.8~1.2):(0.8~1.2);所述游离载体蛋白为BSA。

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权利要求:

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