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申请/专利权人：郑州轻工业大学

摘要：本发明公开了一种生物抑菌包装膜的制备方法及其在火腿保鲜中的应用，本发明使用植物乳杆菌发酵液喷洒改良的生物抑菌包装膜和普通PE保鲜袋对火腿贮藏第2、5、7天ATP关联化合物进行检测，发现ATP关联化合物和腐败微生物数量成正比例关系，生物抑菌包装膜明显对微生物有抑制作用，在保存7天内ATP化合物含量明显少于使用普通PE保鲜袋，可以有效延长火腿切片的货架期。通过平板培养法检测总菌数（TPC）比较，新型生物抑菌包装膜保存火腿切片第2天比普通PE包装总菌数减少59.22%，证明高效液相色谱检测ATP关联化合物水平和微生物数量有着密切的相关性，可以用于火腿切片腐败微生物数量的判断和抑菌剂的筛选。

主权项：1.一种生物抑菌包装膜在火腿保鲜中的应用，其特征在于：对购买的真空包装火腿切片开封进行分装，PE保鲜袋表面用紫外线灯消毒3h，各取75g火腿切片一份装于PE材质保鲜袋内封口，一份装于喷洒过植物乳杆菌活性成分的保鲜袋内封口4℃保存，0～7天内利用高效液相色谱法检测火腿切片中微生物ATP关联化合物含量来确定生物抑菌包装膜的有效性，只用一种流动相溶液不用梯度洗脱程序可高灵敏检测西式火腿中4种ATP关联化合物用于判断腐败微生物数量；所述4种ATP关联化合物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷和次黄嘌呤，高效液相色谱检测ATP关联化合物水平和微生物数量有着密切的相关性，用于火腿切片腐败微生物数量的判断；所述高效液相色谱法检测火腿切片中ATP关联化合物含量的方法如下：（1）样品处理：无菌操作取2g火腿用刀切碎，与12mL5%的高氯酸溶液在无菌取样袋中用拍打式无菌均质器以8次秒拍打2min匀质混匀，制成匀浆样品，并在冰浴条件下静置30min，后取出溶液在4℃13000rmin离心10min，取出2mL上清液加入200µL2molL碳酸钾溶液，震荡摇匀，使其中和，用pH试纸检测pH处于6～6.5，之后，将其在4℃下13000rmin离心10min，取上清液用0.22µm滤膜过滤，备用；（2）标准溶液的配制：将三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、次黄嘌呤、肌苷各称取0.01g与10mL超纯水配置成1mgmL，每个标准品各取2mL混合成为200µgmL的混合标准，然后按比例与超纯水依次配制100µgmL，50µgmL，5µgmL，0.5µgmL，0.05µgmL混合溶液，成为混合标准溶液，上机检测前用0.22μm的微孔滤膜过滤；（3）色谱条件Waters1525-2489HPLC包括泵、注射器、恒温柱室、二极管阵列紫外检测器用于测定ATP、ADP、AMP、Ino和Hx浓度；色谱柱：SunFireTMC18；柱温：25℃；流动相：0.05molLKH2PO4-K2HPO4与甲醇的体积比=9:1；pH值均为6.5，均用0.45μm的微孔滤膜过滤；流速0.6mLmin，进样量10μL，检测波长254nm；所述生物抑菌包装膜的制备方法包括以下步骤：a、出发菌株的活化培养：甘油保藏的植物乳杆菌LactobacillusplantarumGIM1.191，GIMCC，从冰箱内取出，待彻底解冻后，在无菌超净工作台上用移液枪吸取200μL接种于5mL灭菌后的MRS液体培养基中，在37℃恒温培养箱中培养24h，然后以5%的接种量进行传代，使得菌株活化两次；b、生物抑菌包装材料制备：将活化两次的菌液5mL接种于95mLMRS培养基37℃恒温下培养24h后，取30mL菌液3000rmin离心15min；超净工作台中取上清液装入无菌喷壶内，均匀喷涂于PE保鲜袋内表面上，制备含有乳酸菌活性成分的生物抑菌包装膜。

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