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申请/专利权人：天津大学

摘要：本发明公开了合成游离脂肪酸重组大肠杆菌及其构建方法和用途，构建方法为：构建重组质粒ppcnB_956；以重组质粒ppcnB_956为模板，以sg‑pcnB_956‑F和sg‑pcnB_956‑R为上下游引物，扩增得到sg‑pcnB_956表达盒，并无缝克隆到质粒pCF，构建重组质粒pCFp；将重组质粒pCFp转化到合成游离脂肪酸重组大肠杆菌底盘MG1655DE3‑ΔfadE中，得到合成游离脂肪酸重组大肠杆菌；本发明构建的合成游离脂肪酸重组大肠杆菌菌株pcnBi合成游离脂肪酸产量可达2992mgL，相对于对照菌株产量提高了300％。

主权项：1.合成游离脂肪酸重组大肠杆菌底盘的构建方法，其特征是包括如下步骤：1化学转化pKD46质粒到大肠杆菌MG1655DE3，得到重组菌株MD46，培养；2以pKD3质粒为模板，以fadE-pKD3-for和fadE-pKD3-rev为上、下游引物，扩增得到fadE-pKD3-1片段；以fadE-pKD3-1为模板，以fadE-pKD3-F和fadE-pKD3-R为上、下游引物，扩增得到fadE-pKD3-2片段；所述fadE-pKD3-for的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述fadE-pKD3-rev的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述fadE-pKD3-1片段的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述fadE-pKD3-F的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述fadE-pKD3-R的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；所述fadE-pKD3-2片段的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；3将fadE-pKD3-2片段电转到重组菌株MD46感受态细胞中，得到菌液，复苏后涂布到氯霉素的LB平板，培养，得到转化子；4取步骤3获得的转化子，43℃培养缺失pKD46质粒，并验证质粒缺失成功，得到ΔfadE:CmR底盘细胞；5将pCP20质粒电转到ΔfadE:CmR底盘细胞感受态，得到菌液，复苏后涂布到氯霉素和氨苄青霉素的LB平板，培养，得到第二种转化子；6取第二种转化子，43℃培养缺失pCP20质粒，并验证质粒缺失成功，得到合成游离脂肪酸重组大肠杆菌底盘MG1655DE3-△fadE。

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权利要求：

百度查询： 天津大学 合成游离脂肪酸重组大肠杆菌及其构建方法和用途