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申请/专利权人：海南一龄医疗产业发展有限公司
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法，包括以下步骤：1将挂锁探针、连接DNA与miRNA‑21、miRNA‑155混合，退火处理，在连接酶反应缓冲液体系中用DNA连接酶孵育，然后通过热处理终止反应，获得环状DNA模板；2将环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育，然后通过热处理终止反应，获得RCA产物；3在缓冲液中加入预组装的Cas12a‑crRNA、RCA产物和FQ荧光探针，孵育；4荧光信号的测量。本发明通过检测体系的优化，成功实现了双靶标miRNA的检测，且检测灵敏度高。
主权项：1.一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1将挂锁探针、连接DNA与miRNA-21、miRNA-155混合，退火处理，在连接酶反应缓冲液体系中用DNA连接酶孵育，然后通过热处理终止反应，获得环状DNA模板；挂锁探针的序列如SEQIDNO.1所示；连接DNA的序列如SEQIDNO.2所示；2将环状DNA模板与DNA聚合酶、dNTPs、重组白蛋白、引物和聚合酶反应缓冲液一起孵育，然后通过热处理终止反应，获得RCA产物；所述引物的序列如SEQIDNO.5所示；3在缓冲液中加入预组装的Cas12a-crRNA、RCA产物和FQ荧光探针，孵育；所述crRNA的序列如SEQIDNO.6所示；4荧光信号的测量。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 海南一龄医疗产业发展有限公司 一种基于CRISPR与滚环扩增的双靶标miRNA检测方法
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