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申请/专利权人：中国科学院西北高原生物研究所

摘要：本发明属于细胞模型技术领域，具体涉及一种BEAS‑2B细胞炎症损伤模型的构建方法。采用本发明所述构建方法获得的BEAS‑2B细胞炎症损伤模型，稳定可靠，重复性好，接近人体呼吸系统炎症的病理生理状态，可用于呼吸系统炎症损伤相关疾病防治药物的筛选及发病机制的研究。

主权项：1.一种BEAS-2B细胞炎症损伤模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1香烟烟雾提取物的终浓度筛选：将对数生长期的BEAS-2B细胞接种于细胞培养板中培养至细胞贴壁后，加入系列干预组合物进行干预培养24h，所述系列干预组合物包括不同终浓度的香烟烟雾提取物和终浓度为1μgmL的脂多糖，得到多组干预培养后的BEAS-2B细胞；采用CCK8法分别测定所述多组干预培养后的BEAS-2B细胞的细胞存活率，计算所述多组干预培养后的BEAS-2B细胞存活率的IC50值；以所述IC50值的18、14和12的香烟烟雾提取物终浓度作为三个水平的香烟烟雾提取物的终浓度；2脂多糖的终浓度筛选：将对数生长期的BEAS-2B细胞接种于细胞培养板中培养至细胞贴壁后，加入系列干预组合物进行干预培养24h，所述系列干预组合物包括不同终浓度的脂多糖和终浓度为1％的香烟烟雾提取物，得到多组干预培养后的BEAS-2B细胞；采用ELISA法分别测定所述多组干预培养后的BEAS-2B细胞的细胞上清液中的IL-8含量；以IL-8含量与空白对照组具有显著性差异的脂多糖终浓度作为三个水平的脂多糖的终浓度；3干预培养时间的筛选：将BEAS-2B细胞接种于细胞培养板中分别按照不同的干预培养时间进行培养，得到多组培养后的BEAS-2B细胞；采用CCK8法分别测定所述多组培养后的BEAS-2B细胞的OD450nm值，以干预培养时间和对应的OD450nm值分别为横坐标和纵坐标绘制BEAS-2B细胞生长曲线；依据所述BEAS-2B细胞生长曲线选取3个相对生长快速的干预培养时间作为三个水平的干预培养时间；4以所述香烟烟雾提取物浓度、脂多糖浓度和干预培养时间为三因素，以步骤1所述三个水平的香烟烟雾提取物的终浓度为所述香烟烟雾提取浓度的三水平，以步骤2所述三个水平的脂多糖的终浓度为所述脂多糖浓度的三水平，以步骤3所述三个水平的干预培养时间为所述干预培养时间的三水平，设定三因素三水平响应面试验，得到由最优香烟烟雾提取物的终浓度、最优脂多糖终浓度和最优干预培养时间组成的组合条件；5将对数生长期的BEAS-2B细胞接种于细胞培养板中培养至细胞贴壁后，在所述细胞培养板中加入香烟烟雾提取物和脂多糖按照最优干预培养时间进行干预培养25.08h，得到所述BEAS-2B细胞炎症损伤模型；所述香烟烟雾提取物和脂多糖在所述细胞培养板中的终浓度分别为2.25％和0.5μgmL；步骤1-步骤-3的时间顺序不分先后。

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