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申请/专利权人：北京正达康健生物医学科技有限公司
摘要：本发明适用于蛋白质组学检测技术领域，提供了一种激光显微切割样品的蛋白质组学制备方法，包括以下步骤：样品的转移与清洗；样品的复水与酶切；样品脱盐。本发明实施例提供的一种激光显微切割样品的蛋白质组学制备方法，与现有技术相比蛋白提取效率明显提高，样品制备的体积从300微升缩小到30微升，以激光显微切割大鼠肾小球样品为例，利用现有技术提取中的蛋白并进行酶切后通过液相色谱串联质谱检测检测，每个样品的蛋白鉴定数在1000左右，而用本方法蛋白鉴定数可达2000‑3000。
主权项：1.一种激光显微切割样品的蛋白质组学制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品的转移与清洗：将显微切割样品转移到低蛋白吸附的离心管中，向留有样品的离心管中加入无水乙醇，吸除上清，负压抽干仪抽干残余液体；（2）样品的复水与酶切：向样品离心管中加入裂解液，水浴加热，中间进行一次离心，并进行吹打混匀，使样品复水裂解，水浴结束后取出样品离心管进行离心，离心后进行吹打混匀，室温静置，使样品进一步充分复水和裂解；向样品离心管中加入DTT，加热，再自然冷却到室温并吹打混匀；向样品离心管中加入胰酶，吹打混匀，水浴过夜，第二天补加胰酶，继续酶切处理；（3）样品脱盐：向酶切后的样品加入质谱级甲酸并混匀，离心后取上清；将C18脱盐柱放到离心适配器上，并向脱盐柱中加入质谱级乙腈，离心后弃离心液，重复操作；向C18脱盐柱加入甲酸，离心后弃离心液，重复操作；将样品的上清加入脱盐柱中，离心后弃离心液；用甲酸清洗上样后的脱盐柱，离心后弃离心液，重复操作；将脱盐柱用洗脱液洗脱样品、离心操作，吸除上清，抽干残留液体。
全文数据：
权利要求：
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