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一种超快速实时定量PCR方法及其应用 

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申请/专利权人:上海思路迪生物医学科技有限公司

摘要:本发明提供一种超快速实时定量PCR方法。所述方法为:优选扩增子GC含量,同时提高引物探针Tm值,并加入添加剂,从而缩短PCR变性和退火延伸的温度差,减少每轮PCR扩增所需要的时间,实现对目标序列的快速扩增,所述快速扩增程序的每个循环为:88℃‑95℃变性1‑2s;65‑70℃退火延伸5‑10s;扩增子GC含量<62%时,加入添加剂盐酸胍或者盐酸胍和PEG、TWEEN20的组合;扩增子GC含量≥62%时,加入添加剂甲酰胺和或甜菜碱。本发明提供一种缩短PCR变性和退火延伸的温度差的超快速扩增程序,为实现这种快速扩增程序需优选扩增子GC含量,提高引物探针Tm值,使用PCR添加剂提高扩增子解链速率以及引物探针结合效率,使之更适合超快速扩增程序。

主权项:1.一种超快速实时定量PCR方法,其特征在于,所述方法为:根据扩增子GC含量加入添加剂,缩短PCR变性和退火延伸的温度差,实现对目标序列的快速扩增,所述快速扩增程序的每个循环为:88℃-95℃变性1-2s;65-70℃退火延伸5-10s;扩增子GC含量<62%时,加入添加剂盐酸胍或者盐酸胍和PEG、TWEEN20的组合;扩增子GC含量≥62%时,加入添加剂甲酰胺和或甜菜碱。

全文数据:

权利要求:

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