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申请/专利权人：四川大学华西医院

摘要：本发明提供一种结合免疫荧光染色的黏膜淋巴管整体成像的方法，包括：将黏膜标本固定后，放入不同浓度的丙酮溶液中多次浸泡，洗涤；黏膜标本采用CUBIC‑L试剂进行梯度浸泡脱色、脱脂；黏膜标本采用一抗室温孵育，洗涤后采用二抗室温孵育，洗涤；其中，所述一抗为针对目标组织靶抗原的抗体；二抗为带荧光标记的抗体；黏膜标本采用不同浓度的CUBIC‑R+试剂进行折光率匹配至黏膜标本透明；最后在共聚焦、双光子或光片显微镜下进行Z轴拍摄即得。本发明主要适用于食管黏膜也可推及胃黏膜及肠黏膜淋巴管的整体成像，通过免疫荧光染色与CUBIC‑LR+试剂结合，从而处理标本使其在组织透明化的过程中还能保证标本的完整性。

主权项：1.一种结合免疫荧光染色的黏膜淋巴管整体成像的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将黏膜标本固定后，放入不同浓度的丙酮溶液中多次浸泡，洗涤；所述步骤一中黏膜标本固定的具体操作为：将黏膜标本放入5～15％的中性福尔马林进行固定；所述步骤一中不同浓度的丙酮溶液中多次浸泡的具体操作为：将黏膜标本依次放入第一丙酮溶液、第二丙酮溶液和第三丙酮溶液中浸泡，所述第二丙酮溶液的浓度均高于第一丙酮溶液和第三丙酮溶液；步骤二、黏膜标本采用CUBIC-L试剂进行梯度浸泡脱色、脱脂；所述步骤二中CUBIC-L试剂进行梯度浸泡的具体操作为：黏膜标本采用第一CUBIC-L试剂浸泡后，再采用第二CUBIC-L试剂浸泡，洗涤；其中，所述第一CUBIC-L试剂中CUBIC-L的体积分数为40～60％，第二CUBIC-L试剂中CUBIC-L的体积分数为90～100％；步骤三、黏膜标本采用一抗室温孵育，洗涤后采用二抗室温孵育，洗涤；其中，所述一抗为针对目标组织靶抗原的抗体；二抗为带荧光标记的抗体；步骤四、黏膜标本采用不同浓度的CUBIC-R+试剂进行折光率匹配至黏膜标本透明；所述步骤四中不同浓度的CUBIC-R+试剂进行折光率匹配的具体操作为：黏膜标本采第一CUBIC-R+试剂进行折光率匹配，再采用第二CUBIC-R+试剂进行折光率匹配至黏膜标本透明；其中，所述第一CUBIC-R+试剂中CUBIC-R+体积分数为40～60％，所述第二CUBIC-R+试剂中CUBIC-R+体积分数为90～100％；步骤五、透明后的标本于共聚焦、双光子或光片显微镜下进行Z轴拍摄，即得。

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