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申请/专利权人：中国人民解放军总医院第一医学中心

摘要：本发明涉及靶向释药超声造影剂领域，提供了一种靶向释药超声造影剂的制备方法，包括以下步骤：用Fab试剂盒制备αCD276Fab，取Mal‑PEG2000‑DSPE溶于氯仿和甲醇的混合液，将有机溶剂蒸发成膜干燥，取Traut's粉末溶于双蒸水中反应孵育，将αCD276Fab与Mal‑PEG2000‑DSPE胶束溶液置于EP管中孵育，得到αCD276Fab‑PEG2000‑DSPE，将血卟啉、αCD276Fab‑PEG2000‑DSPE等放置于茄形瓶中，向茄形瓶中加入氯仿和甲醇至完全溶解，去除茄形瓶中有机溶剂，得到脂质薄膜，加入PBS缓冲液在非抽真空状态下旋转至薄膜完全脱落，将材料置于冰水浴，使用细胞破碎仪探头超声乳化，同时滴加全氟己烷乳化，过滤得到乳黄色αCD276Fab‑NB‑HP混悬液，本发明为一种包裹声敏剂的抗肿瘤及抗肿瘤血管生成的纳米级CD276靶向超声造影剂，能够在超声引导下监测到药物在靶器官聚集时进行声动力治疗。

主权项：1.一种靶向释药超声造影剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：用Fab试剂盒制备αCD276Fab；S2：取12mg的Mal-PEG2000-DSPE溶于适量体积比为1:1的氯仿和甲醇的混合液，超声混匀，置于旋转蒸发仪上真空旋转，将有机溶剂蒸发成膜，干燥通氮气保护8-12小时；S3：加入3mL双蒸水，旋转水化1小时，待薄膜完全脱落后瞬时超声30s，0.22μm滤器滤过；S4：取1.8mgTraut's粉末溶于10mLpH为9.0的双蒸水中，将αCD276Fab与Traut's试剂1：2质量比反应孵育8-12小时，未反应的溶液通过透析袋透析24小时，每6小时换一次透析液；S5：将处理好的摩尔比为1：50的αCD276Fab与Mal-PEG2000-DSPE胶束溶液置于EP管中4℃孵育8-12小时，使用离心机离心去除上清中未连接的αCD276Fab，离心机转速为11000rpm，时间设定1小时，得到αCD276Fab-PEG2000-DSPE；S6：将摩尔比为9：1：1.6：0.45：0.25的DPPC、胆固醇、血卟啉、αCD276Fab-PEG2000-DSPE、mPEG2000-DSPE放置于茄形瓶中，向茄形瓶中加入6mL氯仿和4mL甲醇，瓶口用封口膜密封，短时超声5min使瓶中液体完全溶解；S7：将茄形瓶安置于旋转蒸发仪上，去除茄形瓶中有机溶剂，可见茄形瓶瓶壁形成一层黄色均一脂质薄膜CD276Fab-CURLip，真空8-12小时干燥；S8：加入pH为7.2的PBS缓冲液10mL于茄形瓶中，在60℃水化，转速90rpm，非抽真空状态下旋转1小时至薄膜完全脱落；S9：将材料置于冰水浴，使用细胞破碎仪探头超声乳化，设置为脉冲模式，强度35％，时间3minon：2s，off：2s，同时逐滴加入1mL全氟己烷乳化，0.22μm滤器滤过得到乳黄色αCD276Fab-NB-HP混悬液，4℃冰箱保存备用。

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