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申请/专利权人:苏州大学
摘要:本发明公开了外泌体蛋白装载方法及其在制备通用抗病毒药物中的应用,利用pLV‑neo载体、CD63蛋白、HA标签、链霉亲和素结合肽SBP构建第一质粒;利用pLV‑puro载体、一系列干扰素刺激基因ISGs、Strep标签、Flag标签构建第二质粒;利用第一质粒、第二质粒分别包装慢病毒,使用慢病毒感染哺乳动物细胞系,获得稳定表达CD63‑HA‑SBP和Strep‑Flag‑ISGs的装载用细胞系;装载用细胞系可自动将ISGs产物富集并包装入外泌体,获得装载ISGs的工程化外泌体。本发明产生的工程化外泌体能够高效地将ISGs导入细胞中,有效发挥ISGs的广谱抗病毒作用,达到抑制病毒增殖、致病的目的。
主权项:1.一种外泌体蛋白装载方法,其特征在于,包括:S100、利用pLV-neo载体、外泌体膜蛋白CD63、HA标签、链霉亲和素结合肽,构建第一质粒,即pLV-neo-CD63-HA-SBP;所述第一质粒表达的CD63-HA-SBP可结合带Strep标签的重组蛋白,同时通过HA标签检测所述第一质粒CD63-HA-SBP的表达;S200、利用pLV-puro载体、多种干扰素刺激基因、Strep标签、Flag标签,构建第二质粒,即pLV-puro-Strep-Flag-ISGs;所述第二质粒表达的Strep-Flag-ISGs可结合所述第一质粒所表达的CD63-HA-SBP,且所述第二质粒表达的Strep-Flag-ISGs与所述第一质粒所表达的CD63-HA-SBP之间的相互作用可被生物素解离,同时通过Flag标签检测所述第二质粒Strep-Flag-ISGs的表达;S300、利用所述第一质粒、所述第二质粒、慢病毒和离体后的哺乳动物细胞系,获得稳定表达CD63-HA-SBP和Strep-Flag-ISGs的装载用细胞系;S400、利用所述装载用细胞系包装外泌体,获得装载ISGs的工程化外泌体。
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权利要求:
百度查询: 苏州大学 外泌体蛋白装载方法及其在制备通用抗病毒药物中的应用
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