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申请/专利权人：韶关学院
摘要：本发明属于基因工程及分子生物学领域，具体涉及一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用。该方法具体包括设计带同源臂和酶切位点的特异引物，利用特异引物扩增外源DNA片段，利用限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ酶切RNA干扰空载体，利用同源重组的方法将外源DNA片段连入到RNA干扰空载体中，形成RNA干扰终载体。该方法在RNA干扰的骨架载体上引入了致死基因，结合同源重组方法，只需要一次同源重组，即可将两个外源DNA片段同时连入RNA干扰载体的两个多克隆位点中，大大缩短了RNA干扰载体构建的周期，载体构建阳性率达到100%。另外，外源片段的选择不再受到酶切位点的限制，可以自由选择，拓宽了靶标的范围。
主权项：1.一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法，其特征在于，所述RNA干扰载体构建方法包括：设计带同源臂和酶切位点的特异引物，利用特异引物扩增外源DNA片段A和外源DNA片段B，利用限制性内切酶BamHⅠ和KpnⅠ酶切RNA干扰空载体，利用同源重组的方法将外源DNA片段A和外源DNA片段B连入到RNA干扰空载体中，形成RNA干扰终载体；其中，用于扩增外源DNA片段A的正向特异引物的同源臂和酶切位点的序列如SEQIDNO.1所示，反向特异引物的同源臂和酶切位点的序列如SEQIDNO.2所示，用于扩增外源DNA片段B的正向特异引物的同源臂和酶切位点的序列如SEQIDNO.3所示，反向特异引物的同源臂和酶切位点的序列如SEQIDNO.4所示；所述RNA干扰空载体具有两个ccdB基因表达盒，所述两个ccdB基因表达盒分别位于RNA干扰载体的两个多克隆位点内部，所述ccdB基因能够使普通大肠杆菌致死。
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权利要求：
百度查询： 韶关学院 一种简单快速高效的RNA干扰载体构建方法及应用
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