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申请/专利权人：赫尔辛基大学

摘要：本公开涉及一种筛选用于在哺乳动物细胞中有效表达和分泌异源多肽的信号肽的方法，所述方法包括以下步骤：提供编码具有各种候选信号肽的目的多肽的病毒表达载体库，其中所述库的每个病毒表达载体包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸包含：i启动子，ii编码信号肽的序列，iii编码所述目的多肽的序列，iv任选地，编码表位标签的序列，和v编码糖基磷脂酰肌醇、GPI、附着的C‑末端信号肽的序列或编码跨膜结构域的序列；用所述病毒载体库转化宿主细胞，使得每个宿主细胞优选地平均仅被来自所述库的一个病毒载体转化；在所述宿主细胞中表达所述融合蛋白，以便产生GPI锚定于所述宿主细胞表面或可替代地通过所述融合蛋白的跨膜结构域锚定于所述宿主细胞表面的融合蛋白；使所述宿主细胞与特异性结合所述目的多肽的第一结合试剂，优选抗体接触，或可替代地如果所述表位标签存在于所述融合蛋白中，则与特异性结合所述表位标签的第一结合试剂接触，其中所述结合试剂任选地用荧光标记或其他检测手段标记；基于每个宿主细胞的荧光特性将转化的宿主细胞分成至少两组；以及对显示最有效融合蛋白表达的宿主细胞组进行下一代测序，以便鉴定所述宿主细胞中所述目的多肽的最佳信号肽。本公开还涉及用于所述方法的载体、宿主细胞或DNA文库。

主权项：1.一种筛选用于在哺乳动物细胞中有效表达和分泌异源多肽的信号肽的方法，所述方法包括以下步骤：a提供编码具有各种候选信号肽的目的多肽的病毒表达载体库，其中所述库的每个病毒表达载体包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述多核苷酸包含：i启动子，ii编码信号肽的序列，iii编码所述目的多肽的序列，iv任选地，编码表位标签的序列，和v编码糖基磷脂酰肌醇、GPI、附着的C-末端信号肽的序列或编码跨膜结构域的序列；b用所述病毒载体库转化宿主细胞，使得每个宿主细胞优选地平均仅被来自所述库的一个病毒载体转化；c在所述宿主细胞中表达所述融合蛋白，以便产生GPI锚定于所述宿主细胞表面或可替代地通过所述融合蛋白的跨膜结构域锚定于所述宿主细胞表面的融合蛋白；d使所述宿主细胞与特异性结合所述目的多肽的第一结合试剂、优选抗体接触，或可替代地如果所述表位标签存在于所述融合蛋白中，则与特异性结合所述表位标签的第一结合试剂接触，其中所述结合试剂任选地用荧光标记或其他检测手段标记；e如果所述第一结合试剂不是标记的结合试剂，则任选地使所述宿主细胞与用荧光标记标记的第二结合试剂、优选抗体接触，其中所述第二结合试剂特异性结合所述第一结合试剂；f基于每个宿主细胞的荧光特性将转化的宿主细胞分成至少两组；g对显示最有效融合蛋白表达的宿主细胞组进行下一代测序，以便鉴定所述宿主细胞中所述目的多肽的最佳信号肽。

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