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申请/专利权人：云南中烟工业有限责任公司

摘要：本发明公开了一种测定新鲜烟叶中七种生物碱含量的方法，包括如下步骤：①配制七种生物碱的标准溶液；②样品处理：称取一定量冻干的新鲜烟叶粉末加入氨水、二氯甲烷提取、分离，得到的上清液；③高效液相色谱‑串联质谱分析；④计算：采用加权回归法，得出各种生物碱的工作曲线及其相关系数；计算即可得到新鲜烟叶中七种生物碱含量。本发明的方法样品处理简便，测定结果准确。

主权项：1.一种测定新鲜烟叶中2,3’-联吡啶生物碱含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：①配制2,3’-联吡啶生物碱的标准溶液；2,3’-联吡啶生物碱标准溶液的配制步骤为：称取2,3’-联吡啶生物碱0.01g，精确至0.0001g；放入100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成2,3’-联吡啶生物碱浓度为100μgmL的标准液；②样品处理：称取一定量冻干的新鲜烟叶粉末，加入氨水和二氯甲烷提取、分离，得到上层清液；③高效液相色谱-串联质谱分析；④计算：采用加权回归法，得出生物碱的工作曲线及其相关系数；计算即可得到新鲜烟叶中2,3’-联吡啶生物碱含量为9.2～20.8μgg；步骤②中样品处理的步骤为：准确称取50mg冻干烟叶粉末到15mL离心管中；加入2mL的6%氨水，振荡2min后静止浸润10min；再加10mL的二氯甲烷，超声20min；4000rmin离心5min，取下层有机相至含有基质分散固相萃取吸附剂的净化管中；2500rmin涡旋振荡2min，再10000rmin离心5min；取0.5mL上层清液到色谱进样瓶，氮吹近干后加1mL甲醇超声复溶后分析；所述基质分散固相萃取吸附剂为N-丙基-乙二胺；步骤③高效液相色谱-串联质谱分析的分析条件为：色谱柱：WatersAcquityBEHC18，规格为2.1×100mm，1.7µm；柱温：30℃；进样量：2μL；流动相：A为含0.2%氨水的超纯水，B为含0.2%氨水甲醇；洗脱程序：0~5min，5%~50%B；5~6.5min，50%B；6.5~7min，50%~5%B；7~10min，5%B；流速：0.3mLmin；质谱扫描方式：电喷雾正离子模式；监测方式：多反应监测；喷雾电压：4500V；雾化气压力：750Lh；辅助气压力：50Lh；离子源温度：150℃；监测离子对优化方式为：采用流动注射方式将1.0μgmL的2,3’-联吡啶生物碱的单一标准溶液以10μLmin流速注入质谱，在电喷雾正离子模式下，以2,3’-联吡啶生物碱的分子离子峰为母离子，进行二级质谱扫描，选择丰度较高的两个碎片离子作为特征离子，以强度最大的作为定量离子对，另外一对作为辅助定性离子对；然后再对2,3’-联吡啶生物碱的定量离子对和定性离子对的锥孔电压和碰撞能量进行优化，使得定量离子与定性离子的离子对强度达到最大。

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