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申请/专利权人：广东齐美生命医学技术研究院;广东齐美医药生物科技集团有限公司;珠海齐美干细胞库有限公司;广东斯旦福国际干细胞医学研究院

摘要：本发明提供了NK细胞外泌体在肿瘤治疗中的应用，本发明是改良了传统的NK细胞外泌体的制备方法，通过与肿瘤细胞共培养技术实现NK细胞的体外增殖，并通过超速离心手段制备获得NK细胞外泌体。经验证，本发明制备得到的NK细胞外泌体保留了NK细胞杀伤活性的标志分子，对肿瘤细胞具备较强的杀伤性能，可有效用于各种类型的肿瘤治疗。

主权项：1.一种NK细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1）从健康受试者的外周血中分离得到外周血单个核细胞；2）将步骤1）中分离得到的外周血单个核细胞进行分选，收集富含NK细胞的细胞悬液；3）将步骤2）得到的富含NK细胞的细胞悬液与肿瘤细胞在培养基中共培养7天；所述培养基是选自DMEM、RPMI1640、F12K、B16F10-LUC中的一种；4）共培养结束后，用流式细胞术进一步分选CD3-CD56+CD16+NK细胞，并通过4℃，2000×g条件下收集细胞上清液；5）对步骤4）中的上清液采用滤膜过滤后，进行超高速离心，离心条件为4℃，100000×g，60min，离心结束后，收集沉淀；6）采用1×PBS重悬步骤5）中的沉淀，并再次进行超速离心，离心条件为4℃，100000×g，60min；7）采用1×PBS重悬步骤6）中的沉淀，经滤膜过滤收集滤液即为NK细胞外泌体；其中，步骤5）和7）中的滤膜为0.22μｍ孔径大小的滤膜；所述肿瘤细胞是选自乳腺癌细胞MDA-MB-231、肺癌细胞A549或黑色素瘤细胞B16中的一种；步骤1）中是采用淋巴细胞分离液获得外周血单个核细胞。

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