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申请/专利权人：广东医科大学附属医院

摘要：本发明提供了一种具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶及其制备方法与应用。本发明的氧化还原敏感性生物活性水凝胶可实现干细胞有效递送和PRP生长因子的局部控释，调节内膜微环境，防止小鼠子宫内膜粘连并加速损伤内膜的修复。采用经巯基改性修饰的天然生物大分子tChi和tHA制备的水凝胶具有无免疫原性、可生物降解性和高生物活性等优点。与现有的临床上治疗宫腔粘连的商业化透明质酸钠水凝胶G‑HA相比，本发明制备的生物活性水凝胶在动物实验中表现出更优异的促子宫内膜修复能力。

主权项：1.一种具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶在制备可递送活性物质的子宫内膜修复药物或治疗宫腔粘连药物中的应用，其特征在于：所述的具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶的制备方法包括如下步骤：（1）将壳聚糖溶于溶液，加入EDAC和NHS，避光搅拌30～90min，调节pH后反应1～3h，加入L-半胱氨酸后继续避光搅拌反应20～30h，透析，离心，干燥后得到巯基化壳聚糖；（2）将透明质酸钠搅拌1～2h溶于溶液，加入EDAC搅拌10～20min，加入NHS继续搅拌30～90min，调节pH至5～6后避光反应1～3h，之后加入半胱氨酸反应30～90min，调节pH至4～5后继续避光搅拌反应20～30h，透析，干燥后得到巯基化透明质酸；（3）将巯基化壳聚糖、巯基化透明质酸和β-GP分别溶解得到溶液，在β-GP溶液中加入巯基化透明质酸溶液并同时快速涡旋，再加入巯基化壳聚糖溶液，再次快速涡旋，之后加入活性物质，快速涡旋混匀，即得到具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶前驱液；（4）将具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶前驱液置于合适温度成胶后，即得到具有氧化还原敏感性和生物活性的水凝胶；步骤（1）所述的溶液与壳聚糖的比例为300～500mL﹕1g；步骤（1）所述的EDAC的加入量以终浓度20～30mM计；步骤（1）所述的NHS的加入量以终浓度20～30mM计；步骤（1）所述的L-半胱氨酸与壳聚糖的质量比为0.5～1﹕1；步骤（2）所述的溶液与透明质酸钠的比例为100～300mL﹕1g；步骤（2）所述的EDAC的加入量以终浓度20～30mM计；步骤（2）所述的NHS的加入量以终浓度20～30mM计；步骤（2）所述的半胱氨酸与透明质酸钠的质量比为0.5～1﹕1；步骤（1）所述的溶液为乙酸溶液；步骤（1）所述的避光搅拌的条件为室温，800～1000rpm；步骤（1）所述的调节pH为调节pH至4.5～5.5；步骤（1）所述的透析为使用MW3000～4000的透析袋在pH3～4的去离子水中透析；步骤（1）所述的离心为3000～5000rpm离心；步骤（2）所述的溶液为去离子水；步骤（2）所述的透析为使用MW3000～4000的透析袋，分别用pH3.5的去离子水透析一天，用pH3.5的1%NaCl水溶液透析一天，用pH3.5的去离子水透析一天；步骤（3）所述的巯基化壳聚糖溶液为将巯基化壳聚糖溶于乙酸溶液得到的；步骤（3）所述的巯基化壳聚糖溶液的浓度为20mgmL；步骤（3）所述的巯基化透明质酸溶液为将巯基化透明质酸溶于水得到的；步骤（3）所述的巯基化透明质酸溶液的浓度为20mgmL；步骤（3）所述的β-GP溶液为将β-GP溶于水得到的；步骤（3）所述的β-GP溶液中β-GP与溶液的质量体积比为0.58﹕1；步骤（3）所述的巯基化透明质酸溶液、巯基化壳聚糖溶液、β-GP溶液的体积比为2﹕1﹕1；步骤（3）中所述的快速涡旋为使用漩涡混匀仪快速涡旋10～15s；步骤（3）所述的活性物质为PRP生长因子复合物和小鼠脂肪间充质干细胞；所述的PRP生长因子复合物与凝胶前驱液的体积比为1﹕4～10；所述的PRP生长因子复合物的制备方法包括如下步骤：小鼠外周血1000rpm离心10min后取上层清液、中间白膜层和下层3mm红细胞，继续3000rpm离心10min去除下层红细胞和上层的低浓度血小板血清，留取中间白膜层和少量红细胞，每毫升添加20U牛凝血酶，与10%CaCl2溶液按9:1体积混合，置于37℃培养箱中孵育40min，取出2000rpm离心10min，即得到PRP生长因子复合物；所述的小鼠脂肪间充质干细胞与凝胶前驱液的比例为400～1500个﹕1微升；所述的小鼠脂肪间充质干细胞为细胞融合度70～90%的对数期小鼠脂肪间充质干细胞；步骤（4）中所述的成胶为置于35～40℃下成胶3～10min。

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