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申请/专利权人：青岛农业大学
摘要：本发明涉及马铃薯病毒实时监测技术领域，具体涉及一种用于检测马铃薯帚顶病毒的荧光定量PCR检测方法，包括S1引物设计；S2核酸提取；S3标准曲线制作；以及S4熔解曲线制备。本发明的方法快速简单，耗时短，灵敏度高，定量检测方便，特异性强，检测结果可靠，使得本发明的方法可作为马铃薯帚顶病毒筛查的有效手段，通过快速高效的病毒检测技术能够及时筛选出带毒株系,有效阻断马铃薯帚顶病毒在马铃薯种薯中的累积传播，有望在应对马铃薯帚顶病毒检疫性病毒扩散传播的风险方面发挥作用。
主权项：1.一种用于检测马铃薯帚顶病毒的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1引物设计，根据GenBank中PMTV的外壳蛋白基因序列的保守区域，设计合成引物；S2核酸提取，利用Trizol法提取植物总RNA；S3标准曲线制作，总RNA反转录成cDNA，以cDNA为模板进行目的片段的扩增，扩增后的PCR产物经过电泳分离，并将目的片段回收用于连接和转化，阳性质粒DNA经过测序验证，正确的序列将用于进一步的实验，使用超微量分光光度计N50T来测定质粒的浓度，并计算其拷贝数；计算公式如下，质粒拷贝数＝质粒浓度×6×1014M×X；S4熔解曲线制备，SYBRGreenI荧光定量PCR反应按照试剂盒操作说明进行，程序执行完毕后，分析扩增和熔解曲线数据，使用质粒DNA稀释液制备熔解曲线，对每个浓度的质粒DNA进行3次重复试验。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 青岛农业大学 一种用于检测马铃薯帚顶病毒的实时荧光定量PCR方法
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