龙图腾网&IPTOP
- 微信扫码登录
- 账号密码登录
- 短信登录/注册
买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！
申请/专利权人：沈阳药科大学
摘要：本发明提供一种提高GLP‑1Fc融合蛋白产量的方法，属于基因工程技术领域，所述方法包括在CHO细胞中引入thbd基因并得到该基因的稳定过表达细胞株，所述thbd基因编码血栓调节蛋白。本发明方法可以显著提高重组蛋白特别是GLP‑1Fc抗体类在CHO细胞中的表达水平，对生物制药行业中相关重组蛋白的生产具有很好的应用前景。
主权项：1.一种提高GLP-1Fc融合蛋白产量的方法，其特征在于：所述方法包括在未敲除内源性thbd的CHO细胞株中进行thbd基因的过表达并得到所述基因的稳定过表达细胞株，所述thbd基因编码血栓调节蛋白；所述在未敲除内源性thbd的CHO细胞株中进行thbd基因的过表达包括如下步骤：（1）质粒的制备：将基因序列如SEQIDNO：1中所示的thbd基因序列克隆至经NheI和HindIII双酶切的载体p3.1-EGFP-PuroR中得到质粒p3.1-EGFP-PuroR-thbd；（2）取1×107个CHO细胞至15mL离心管，在800rpm的转速下离心5min，倒掉上清；再用5mL电转培养基重悬上述细胞沉淀后在800rpm的转速下离心5min，倒掉上清；重复洗涤三次后，取30μg的质粒p3.1-EGFP-PuroR-thbd，再用培养基补齐至400μL体积并重悬细胞后一起转入电转杯中，用300V电压进行电击，然后将细胞置于90mm培养皿中培养24小时后利用流式细胞仪进行阳性细胞的分选，分选后的细胞按1个细胞孔，铺96孔板，共15块，置于37℃恒温孵箱内；在铺板后的7-8天需对细胞的生长状态进行观察，挑出单克隆，逐步扩大至24孔板、六孔板最后实现摇瓶的无血清悬浮培养；利用WB，对得到的单克隆细胞进行TM蛋白的表达水平检测，确定thbd基因稳定过表达的细胞株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 沈阳药科大学 一种提高GLP-1 Fc融合蛋白产量的方法
免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。
主营中国专利交易买卖与专利转让许可,高校科技成果推广与科技成果转化,知识产权运营管理与平台开发,科技人才专家库与科技猎头等科技服务
开放平台
担保交易
惠及多方
会员特惠
专属平台
适合多方
数据共享
功能齐全
皖公网安备 34010402703815号