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申请/专利权人：聊城大学

摘要：本发明涉及一种高效、快速、无需样品前处理的检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱（Pyrrolizidinealkaloids，PAs）的方法，经过下述步骤：（1）纳米银表面增强激光拉曼光谱（SurfaceenhancedRamanscattering，SERS）基底的合成；（2）纳米银SERS基底的表征；（3）基于SERS的4种PAs的定性及定量分析；（4）基于SERS的蜂蜜中PAs的检测。与现有的PAs的检测方法（液相色谱法、酶联免疫吸附分析、气相色谱‑质谱法及液相色谱‑质谱法）相比，本方法无需任何的样品前处理操作，步骤简单、高效快速、选择性和灵敏度均很高，适合批量样品的快速测定。

主权项：1.一种检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱的方法，其特征在于，步骤为：（1）SERS基底的合成：所述SERS基底为纳米银SERS基底；在室温下，量取一定量的超纯水于烧杯中，用氨水调节pH至9.0，在搅拌状态下，依次加入0.1molL的柠檬酸钠溶液和0.2molL的抗坏血酸溶液，然后，逐滴加入0.1molL的硝酸银溶液，在搅拌状态下反应；反应结束后，先用超纯水洗涤，再用乙醇洗涤，每次洗涤后离心，弃去上层清液；洗涤结束后，加入超纯水，使银纳米粒子浓缩，于冰箱保存备用；（2）SERS基底的表征：分别用扫描电镜、透射电镜对合成的纳米粒子的形貌、分散情况及粒径进行测定，并对其紫外吸收光谱图进行扫描；（3）基于SERS的4种PAs的定性及定量分析：取4种PAs对照品粉末于载玻片上，所述4种PAs对照品分别为野百合碱、千里光菲啉、倒千里光碱、千里光宁，在无增强基底的情况下，进行了拉曼光谱扫描；用于野百合碱的定量分析的SERS特征峰为799cm-1、927cm-1、1028cm-1、1403cm-1、1642cm-1，用于千里光菲啉的定量分析的SERS特征峰为800cm-1、1023cm-1、1080cm-1、1393cm-1、1583cm-1，用于倒千里光碱的定量分析的SERS特征峰为801cm-1、932cm-1、1025cm-1、1406cm-1、1413cm-1，用于千里光宁的定量分析的SERS特征峰为700cm-1、941cm-1、1025cm-1、1406cm-1、1633cm-1；用于4种PAs的拉曼光谱检测的激光波长为325nm、532nm、633nm、785nm；用于4种PAs的拉曼光谱检测的激光激光功率为1%~10%，曝光时间为5~15s，用于蜂蜜样品中4种PAs的拉曼光谱检测的激光波长为325nm、532nm、633nm、785nm；将4种PAs对照品分别用甲醇溶解后与SERS基底等体积混合，取混合均匀的样品，滴加在载玻片上，待其自然风干后，进行拉曼光谱检测，确定用于定量分析的特征峰；分别取不同浓度的4种PAs的标准溶液，与SERS基底等体积混合；取混合均匀的样品，滴加在载玻片上，待其自然风干后，进行拉曼光谱检测，分别以特征峰的强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线，拟合得到线性回归方程及相关系数；（4）基于SERS的蜂蜜中PAs的检测：将蜂蜜样品用超纯水稀释后与SERS基底等体积混合；取混合均匀的样品，滴加在载玻片上，待其自然风干后，进行拉曼光谱检测，记录特征峰的强度，计算蜂蜜样品中PAs的含量。

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