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一种环二鸟苷酸含量变化检测模型构建方法 

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申请/专利权人:湖南城市学院

摘要:本发明提供了一种环二鸟苷酸含量变化检测模型构建方法,属于基因工程技术领域,本发明在不破坏细菌菌体情况下,利用分子克隆手段尝试将核糖开关检测模型适体部分串联,结果显示核糖开关适体部分串联后不影响菌体正常生长,检测灵敏性比不串联核糖开关提高。无需将细胞破碎即可对活体内的环二鸟苷酸含量进行实时分析,使得活体内的环二鸟苷酸含量检测更灵敏、更简单便捷。

主权项:1.一种环二鸟苷酸含量变化检测模型构建方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、提取嗜水气单胞菌基因组和pET-24a+连Ahy-1质粒,稀释后电泳检测;S2、根据S1得到的基因组和质粒为模板,通过Ahy1-1特异引物PCR扩增,得到了适体结构域序列和核糖开关特异序列;S3、将适体结构域序列和核糖开关完整序列在DNA聚合酶加A后连入T载体,转化成功后进行菌液PCR鉴定;进行序列测定,序列正确,无突变;S4、提取适体结构域序列和核糖开关完整序列连T载体质粒并用双酶酶切后胶回收目的片段;S5、提取载体pET24-a+质粒,稀释后电泳检测;S6、将上述酶切回收片段分步连入pET24-a+载体后,转化入DH5а进行PCR鉴定;S7、验证串联后的核糖开关功能,将连接有二鸟苷酸环化酶共表达载体pACYC177转入菌体中进行功能验证。

全文数据:

权利要求:

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